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时间:2018-07-08
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1、脑缺血性损伤后的皮层突触再生与运动功能恢复论文.freelia;postsynapticdensity;motorfunctionAbstract:AIMToevaluatethedistributionanddensityofexpressionofproteinsknootorfunctionofforelimbsafterfocalis-chemiainrats.METHODSUnilateralcerebralischemiaiddlecerebralarteryocclusion(MCAO)
2、.SynaptophysinandPSD-95inedbyim-munohistochemicaltechniques.Forelimbsfunctionulationtest.RESULTSBothsynapto-physinandPSD-95demonstratedstatisticallysignificantin-creaseinthedensityofimmunoreactionintheneocorticalre-gionsmedialandlateraltotheinfarctionas
3、con-trols.Meanbsfunctionrecoveryhasstatisticallysignificantincreasedat21thday.CONCLUSIONChangeofneocorticalstructureiddlecerebralarteryocclusion,MCAO)模型.用一细的线栓通过颈总动脉插入颈内动脉,并顺着颈内动脉向颅内推进18~23mm,即可造成大脑中动脉的完全阻断.神经症状评定分级:O级:未见行为缺陷;1级:前肢屈曲(即提尾悬空试验阳性);2级:侧推抵抗力
4、下降;伴前肢屈曲,无转圈行为;3级:同2级行为,伴自发旋转.手术组对照组的手术过程除不阻断动脉血流外,其余步骤均同手术组.1.2行为测试采用触觉刺激试验(tactilstimula-tiontest),方法为:对所有对照组大鼠及术后第7,14,21,28日的大鼠,在固定时间.将0.5cm×0.5cm的医用胶布粘于大鼠两前爪腹侧面后,送入观察箱中,记录其撕去胶布所使用的时间.1.3灌注与免疫组织化学染色各观察时间点的大鼠,用10gL-1戊巴比妥钠(30mgkg-1,ip)麻醉,40gL-1的多聚甲醛灌注
5、固定,取大脑标本,连续冠状面切片,片厚40μm,0.01molL-1KPBS清洗10min×3→浸入含3mLL-1Triton×100的0.01molL-1KPBS液中30min→0.01molL-1KPBS清洗10min×3→分别入突触素(SynaptophysinSYN1∶1000Sigma)或突触后致密物质(Postsynapticdensity-95PSD-951∶1000SantaCruzBiotech,INC)一抗溶液,4℃下孵育24~48h;取出入0.01molL-1KPBS清洗10mi
6、n×3→分别入相应的二抗溶液(SYNRabbitA-Rabbit1∶400;PSD-95RabbitA-Goat1∶200),室温下孵育2h→0.01molL-1KPBS清洗10min×3→浸入ABC复合物(1∶400Santa),室温下孵育2h,硫酸镍胺加强的DAB蓝色反应法呈色,同时用0.01molL-1KPBS取代一抗做空白对照.贴片、脱水、透明、中性树胶封片.光镜观察.以LeicaQ570C真彩色图象分析仪进行灰度定量分析,在损伤的内、外、对侧分别选5个高倍视野取测定数值减去背景测定数值的绝对
7、值进行阳性物质密度值统计学分析,所有数据用x±s表示,两样本均数用t检验比较.2结果2.1行为学测试大鼠前肢的功能在MCAO之后的第7日较之对照组明显降低,第14日有所恢复,于第21日较之损伤后恢复显著(P0.01),并基本接近正常(Tab1).表1大鼠前肢触觉刺激试验(略)2.2突触素(synaptophysin,SYN)免疫反应产物的分布在MCAO术后的第7日于梗塞区内、外和对侧顶叶皮质的SYN免疫反应复合物较之对照组明显减少,从第14日起及以后的几周这些部位的SYN显著增加(P0.01,Tab2
8、).对照染色均无SYN免疫反应复合物的出现.2.3突触后致密物质┐95(postsynapticdensity┐95,PSD┐95)免疫反应产物的分布与突触素的结果相似,PSD-95的免疫反应复合物在MCAO术后的第7日在梗塞区内、外侧和对侧顶叶皮质较之对照组明显减少,从第14日起以及以后的几周这些部位的PSD-95显著增加(P0.05,Tab2).对照染色均无PSD-95免疫反应复合物的出现.表2不同时间点在大鼠皮层不同部位突触素免疫反应复合物的灰度值
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