葫芦茶根中总多酚提取富集工艺研究论文

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1、葫芦茶根中总多酚提取富集工艺研究论文史丽颖，周旭东，石海峰，王永奇【摘要】目的优选葫芦茶根中总多酚提取富集工艺。方法以总多酚含量为考察指标，采用单因素实验和正交实验结合的方法优选葫芦茶根中总多酚的提取工艺，并优选D101型大孔树脂富集葫芦茶根中总多酚的最优条件。结果优化条件结合工业生产实际，确定其最佳提取工艺条件为30℃，50%丙酮.freel(L.)Ohashi的全草，为民间常用中草药，主产于广西、江西、广东、福建等地1，2。本品性凉，味微苦、涩，具有清热解毒、消积利湿、杀虫防腐等功效，临床用于预防中暑，治疗感冒发热、咽喉肿痛、急性肾炎、黄

2、疸肝炎、肠炎、细菌性痢疾、妊娠呕吐等3。目前对该植物的化学成分和生物活性的研究已有报道4~6，发现其具有抑菌和杀灭椎实螺的作用。我们在研究中发现葫芦茶根中多酚类成分具有较强的杀软体动物作用，因此我们对其富含的多酚类成分的提取和富集工艺进行了考察，旨在提高总多酚的收率，为其综合开发利用奠定基础。1仪器与试药Unico7200可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司);Laborata4000型旋转蒸发仪(Heidolph公司);BP210S十万分之一电子天平(Sartorius公司);V-560紫外可见分光光度计(Jasco公司)葫芦茶全草，20

3、06-03采集于广西壮族自治区平南县，经辽宁师范大学陈辰教授鉴定为Tadehagitriquetrum(L.)Ohashi;没食子酸(南京泽朗医药科技有限公司，批号：ZL20090403YG，纯度99.68%);D101型大孔吸附树脂(天津海光化工有限公司);所用试剂均为分析纯;实验用水为蒸馏水。2方法与结果2.1总多酚含量测定方法7~92.1.1标准曲线的绘制精确称取干燥至恒重的没食子酸对照品10mg，置于100ml棕色容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取25ml，置于100ml棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得到浓度为0.0

4、25mg/ml的对照品溶液。分别精确吸取没食子酸对照品溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0和2.5ml置于10ml棕色容量瓶中，各加水至5ml，再分别加入Folin试剂1ml，用29%Na2CO3溶液稀释至刻度，摇匀，以相应的试剂为空白，30min后，在754nm波长下测定吸光度值，以吸光度值为纵坐标，浓度(mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程C=3.023A+0.0405(r=0.9995)，其线性范围为0.0025～0.0125mg/ml。2.1.2样品溶液的测定准确称取30.0g粉碎后葫芦茶根，置于500ml的圆底烧瓶中，按

5、实验设置的处理条件提取，回收溶剂后冷冻干燥，准确称取待测样品50mg，用水溶解，置于100ml的容量瓶中并定容。摇匀，精密量取10ml置于100ml的棕色容量瓶中定容，摇匀，准确量取2ml于10ml棕色容量瓶中，按“2.1.1”项下自“各加水至5ml”起，同法测定吸光度，计算总多酚的含量和收率。2.2葫芦茶根中总多酚提取工艺优选10，112.2.1因素与水平首先对溶媒浓度、提取温度、提取时间、料液比和提取次数进行了单因素实验，确定了各因素最佳条件分别为：60%丙酮，40℃，6h，1∶8和3次。对各因素进行综合分析，固定提取次数3次，对温度(A

6、)，溶媒浓度(B)，提取时间(C)，料液比(D)进行考察，以总多酚含量为考核指标，按4因素3水平进行L9(34)正交实验。各因素水平安排见表1表1考察因素及水平水平A温度T/℃B溶媒浓度(%)2.2.2正交实验设计及结果按L9(34)正交设计表安排实验，正交设计及实验结果见表2。由表2分析结果可知，在葫芦茶总多酚的提取工艺中，各因素对提取效果的影响程度依次为ABCD，最优水平组合为A1B1C1D2，即最佳提取工艺为8倍量50%丙酮，30℃提取3次，4.5h/次。2.2.3验证实验精确称取粉碎后葫芦茶根30.0g(平行6份)，置于500ml的圆

7、底烧瓶中，加入8倍量50%丙酮，30℃提取4.5h，提取3次。回收溶剂后冷冻干燥。按“2.1.2”项下操作在754nm波长下测定吸光度。6次测定结果，总多酚平均含量为27.34%，总多酚平均收率为6.26%。结果表明确定的工艺条件优于正交实验中的任何一组，且重复性较好，说明确定的工艺合理。2.3葫芦茶根中总多酚富集工艺优选122.3.1D101型大孔吸附树脂的预处理取一定量的D101大孔树脂，95%乙醇浸泡24h，将其装入树脂柱内，先以95%乙醇洗至流出液中加3倍量水后无白色混浊现象，改用蒸馏水冲洗至无醇味，备用。表2正交设计及实验结果2.3

8、.2静态吸附量的确定在250ml的锥形瓶中加入5g预处理后的D101大孔吸附树脂以及100ml样品溶液(浓度为9.36mg/ml)。室温条件下振荡24h，取上清液测