游离脂肪酸对大鼠胰岛细胞体外分泌功能的影响

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1、游离脂肪酸对大鼠胰岛细胞体外分泌功能的影响：惠晓丽，王惠芳，刘惊涛，刘靖芳，徐利【关键词】游离脂肪酸摘要：目的探讨饱和脂肪酸软脂酸和单不饱和脂肪酸油酸对大鼠胰岛细胞体外分泌胰岛素功能的影响。方法体外分离大鼠胰岛细胞，分为：①浓度梯度组，将0.125、0.25、0.5mmol/L软脂酸(PA)和油酸(OA)分别与胰岛细胞共培养48h；②时间梯度组，将0.25mmol/L软脂酸、油酸及二者的混合物与胰岛细胞共培养24、48、72h，进行葡萄糖刺激胰岛素释放试验，放射免疫法检测培养液中胰岛素浓度。结果①浓度梯度组，不同浓度PA和OA组葡萄糖刺激后胰岛素分泌水平均明显减少，浓度越高胰岛

2、素分泌越少，高浓度时(0.5mmol/L)，高糖刺激下OA组胰岛素分泌高于PA组；②时间梯度组，PA、OA及混合组，葡萄糖刺激后胰岛素分泌水平均明显减少，随时间延长，胰岛素分泌逐渐减低；相同时间段，各组胰岛素分泌无差异(P>0.05)。结论PA和OA对大鼠胰岛细胞分泌功能均有一定的抑制作用，呈剂量依赖性，PA抑制程度呈时间依赖性；高浓度时PA抑制程度大于OA；OA对PA诱导的胰岛细胞分泌功能损伤无保护及协同效应。　　关键词：游离脂肪酸；软脂酸；油酸；胰岛细胞；葡萄糖刺激的胰岛素分泌　　　　ABSTRACT:ObjectiveTostudytheeffectsofsatur

3、atedfreefattyacidspalmiticacid(PA)andmonounsaturatedfreefattyacidsoleicacid(OA)ontheinsulinsecretingfunctionofratpancreaticislets.MethodsIsolatingandculturingtheratpancreaticisletsinvitro,①theconcentrationgroupexposedtheisletstoPA,OAatdifferentconcentrations(0.125,0.25,0.5mmol/L)for48h;②thet

4、imegroupexposedtheisletsto0.25mmol/LPA,OAandakindofmixtureofthem(bothconcentrationsare0.25mmol/L)for24h,48h,72h,thenmadeaglucosestimulatedinsulinsecretiontestrespectively,examinedinsulinlevelineverygroupbyradioimmunoassayafterstimulatedbylo.Results①Theconcentrationgroupinsulinlevelineverygro

5、upofPAorOAafterstimulatedbylomol/L),insulinlevelofOAgroupafterstimulatedbyhighglucoseishigherthanthatofPAgroup;②ThetimegroupinsulinlevelineverygroupofPA,OAandthemixturegroupafterstimulatedbyloeduration.ConclusionBothPAandOAexertinhibitionontheinsulinsecretionfunctionofratpancreaticislets,and

6、thedegreeofimpactindicatsaconcentrationdependantfashion.TheeffectmadebyPAindicatsatimedependantfashion.OAcanntprotectisletsfromPAinducedtoxicityandtheydonthavesynergisticeffectsonimpairingthesecretingfunctionofislets.　　KEYI1640购自Gibco公司，胰岛素放免检测试剂盒购自中国原子能科学院。成年SD大鼠，8-10周龄，体重250-300g，购自西安交通大学医

7、学院实验动物中心。　　1.2胰岛的分离纯化成年SD大鼠,腹腔麻醉，剖腹，丝线接扎胆总管入十二指肠处，破心放血处死。胆总管内插管，逆行灌注0.5g/L胶原酶Ⅴ10mL，分离已膨胀胰腺，38℃水浴振荡10min取出，冰浴中撕碎，继续38℃水浴振荡10min后，DHanks液终止消化，未消化组织加入胶原酶Ⅴ继续消化，重复1-2次，直到组织完全消化。收集所有消化液，500μm筛网过滤，DHanks液离心洗涤3遍，沉淀物制成悬液。离心管中，依次加入250、200、110g/LFicoll分离液和胰岛悬