中药甘松挥发油对hek细胞nav1.5电流电压及电导电压的影响论文

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1、中药甘松挥发油对HEK细胞Nav1.5电流电压及电导电压的影响论文葛郁芝，吴志婷，胡朗吉，YehJay【摘要】目的应用膜片钳技术研究HEK细胞Nav1.5电流电压依赖性Na+电流失活与激活曲线,甘松挥发油对电流-电压关系(I-V)，电导-电压关系(G-V)曲线的影响,以及对快Na+通道失活(H-I)的影响。方法应用膜片钳技术研究HEK细胞Nav1.5电压依赖性Na+电流失活曲线,IV和HI曲线。结果正常自然依赖性失活曲线向超极化移位，移动速度10min内是4mV。甘松挥发油能降低I－V曲线Na电流的峰电位，但不

2、能改变其Na电位（ENa）从内流向外流的反转电位的方向。GV曲线明显向超极化方面移动，Vg1/2=(-59.8±4.22)mV是对照自然失活曲线；Vg1/2=(-58.8±5.69)mV是10PPM甘松挥发油；Vg1/2=(-68.0±4.36)mV是药物被洗脱后失活曲线（P＜0.01.freelV(P0.01,n=5)，洗脱40min后接近对照状态。结论甘松挥发油对IV，GV曲线有向超极化移位的影响。对快Na+通道有加速失活与抑制激活的作用,然而电压依赖性Na失活是可逆性的。这一作用奠定了甘松挥发油抗心律失

3、常的作用机制。【关键词】甘松挥发油；HEK细胞；Nav1.5；膜片钳Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsoftraditionalChinesemedicinevolatileoilofNardostachyChinesisBatal(TCMVONCB)onthecurvesofcurrent-voltagerelationship(I-V)，conductance-voltagerelationship(G-V)andfastNachannelinactivation

4、(H-I)ofvoltage-dependentinNav1.5channelsinhumanembryonickidney(HEK)cells.MethodsTheptechniqueandHEKcellsployedtoresearchtheeffectsofTCMVONCBonthecurvesofI-V，G-VandH-Iofvoltage-dependentcurrentinNav1.5channels.ResultsTCMVONCBreducedthepeakofNacurrentintheI-Vcur

5、ve,butcouldchangeitsNa(ENa)reversalpotentialdirectionfromovetothehyper-polarization,Vg1/2=(-59.8±4.22)mVVVTCMVONCBhassignificanteffectsonthecurrentofNav1.5afterremovingthenaturalmovementinthevalue,theVg1/2after10pmmTCMVONCBV(P0.01,n=5)paringthecontrol,after40m

6、inofovebackandclosetothestateofcontrol.ConclusionTCMVONCBhastheeffectsofhyper-polarizingshiftonthecurvesofI-VandG-VandNachanneltoacceleratefasterdeactivationandinhibitactivation,butvoltage-dependentNainactivationisreversible.Thisroleisbasicanti-arrhythmicmecha

7、nismsfortheTCMVONCB.KeypHEKcells实验与临床证明，目前被广泛使用的抗心律失常中成药（稳心颗粒等）中的主要有效成分甘松具有良好的抗心律失常作用［1～3］。以往一般电生理研究方法发现，甘松乙醇或水的提取液具有拮抗氯化钡诱发大鼠心律失常的作用，对氯仿和肾上腺素诱发的家兔心律失常也有拮抗作用，并能延长家兔离体心房的不应期。然而，其确切的细胞电生理、电药理机制及药物直接作用靶点尚不清楚［1,3］。为今后进一步对甘松有效成分挥发油深入研究,本实验除应用膜片钳技术和大鼠心肌细胞外还应用HEK细胞Na

8、v1.5,这种细胞是利用大鼠cDNA密码编程心肌钠通道密码子序列，在人体肾胚胎细胞上表达而产生的一种新型克隆细胞(humanembryonickidney，HEK)［4～6］。克隆的HEK细胞Nav1.5心肌纯钠通道不但使得膜片钳实验中操作的难度大大降低，还使得实验得出的结果更准确，大大促进了该领域的研究工作。本实验在应用细胞膜片钳技术对Nav1.5单纯钠通