由一株放线菌产生的对谷胱苷肽转移酶具有抑制作用的

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1、由一株放线菌产生的对谷胱苷肽转移酶具有抑制作用的【摘要】谷胱苷肽-S-转移酶-π(GST-π)的活性在某些类型的癌症患者中有显著的升高并且在癌症细胞对抗癌药物耐药性的形成过程中起着重要的作用。抑制过量表达的GST-π的酶活性将有助于克服肿瘤细胞的耐药性，因此，GST-π被认为是一个潜在的药物作用靶点。利用我所建立的GST-π抑制剂高通量筛选模型，在筛选针对GST-π的新的抗癌药物增敏剂的过程中，发现由一株放线菌550产生的发酵代谢产物对于人的GST-π产生明显的抑制活性。经有机溶媒萃取、葡聚糖凝胶LH-

2、20柱层析、HPLC制备等方法，从该菌的发酵液中分离到了一个对GST-π有中等程度抑制活性的化合物550-a，其IC50为21.4μg/ml，经各种理化性质及NMR分析确定该化合物与木黄酮(genistein)同质，该化合物对GST-π的酶抑制活性以前尚未见报道。【关键词】谷胱苷肽转移酶；酶抑制剂；木黄酮ABSTRACTGlutathioneS-transferase-π(GST-π)levelusuallyincreasedapparentlyinsufferringfromcertainkindso

3、fcancers,anditplayedanimportantroleintheprocessofdrugresistanttumorcellsagainstanti-tumoragents.Inhibitionoftheoverexpressedenzymeactivityent.ByusingtheGST-πhighthroughputscreeningsystemmodelycetestrainNo.550hasshoedNo.550-Athemycelium,andbysolventextrac

4、tionbySephadexLH-20columnchromatography,andHPLCpurification,thepoundshooderateactivityagainstGST-πl,byphysico-chemicalspectralanalysis,thestructureofthepoundeinhibitor;Genistein谷胱苷肽-S-转移酶(glutathioneS-transferase，简称GST)为细胞内存在的具有解毒作用的酶蛋白［1］，广泛分布于动、植物内。GST

5、作为一种具有多种生理功能的药物代谢酶参与机体的解毒作用，可解除化学诱变剂、促癌剂等的毒性。GST催化还原型谷胱苷肽(glutathione，简称GSH)与亲电子药物(X)共价结合成GS-X复合物，再转运出体外而发挥解毒作用。谷胱苷肽转移酶具有多个亚型［2］，其中GST-π是最重要的一种。研究表明，GST-π的酶活性在多种类型肿瘤的患者体内有异常的升高，其水平与肿瘤的耐药性密切相关［3～5］，高活性的GST-π可使肿瘤细胞对某些化疗药物的耐药性升高，导致化疗失败［2］。探讨GST在肿瘤耐药机制中的作用并以

6、GST-π为靶点寻找特异性的抑制剂，对提高临床化疗的敏感性、克服肿瘤的耐药性将产生重要的意义［6］。GST-π的酶活性在多种肿瘤患者体内有明显增高，其水平与肿瘤的耐药性密切相关，两者具有明显的功能关系。我们以GST-π为靶点，建立了一个GST抑制剂的高通量筛选模型，应用此模型对从微生物的4800个代谢产物进行了筛选，在筛选过程中发现由一株放线菌550产生的发酵产物对于人的GST-π产生明显的抑制活性，本文报道对放线菌550所产生的活性物质的研究结果。1材料与方法1.1材料(1)主要试剂人源(humanp

7、lacenta)谷胱苷肽-S-转移酶-π、底物1-氯-2，4-二硝基苯(1-chloro-2，4-dinitrobenzene，简称CDNB)和还原型谷胱苷肽(GSH)均购自Sigma公司；其余化学试剂均为分析纯或色谱纯试剂。(2)主要仪器设备Victor21420多功能测定仪(美国PE公司)，低温离心浓缩仪(德国Christ公司)。(3)菌株550的放线菌550我国云南省。1.2方法(1)GST-π的酶活性测定［7］在96孔板的样品测定孔中分别加入2μl的待测样品、45μl3mmol/LCDNB底物工

8、作液和30μl酶液；对照孔和空白孔分别以2μlDMSO和30μl测活缓冲液代替酶液，其余与样品孔相同。30℃保温15min，各孔加入浓度为2.5mmol/L的GSH底物工作液25μl，使反应体系中CDNB和GSH的终浓度分别为1.8和1.5mmol/L。离心2min并振摇混匀，测定各孔在340nm波长处的吸光度(A1)，30℃保温30min后，再测定各孔在340nm波长处的吸光度(A2)。样品对GST酶抑制率的计算公式为：抑制率(%)=(A