麝香石斛组织培养过程中生长效应及多糖含量变化

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1、麝香石斛组织培养过程中生长效应及多糖含量变化摘要：麝香石斛（DendrobiumparishiiRchb.f.）是原种石斛，具有很高的观赏价值和药用价值。试验利用组织培养技术筛选培养基合适的激素浓度，在最优条件下观察麝香石斛试管苗7～108d的生长情况，分析麝香石斛不同生长阶段植物多糖含量的变化情况和积累规律。结果显示，麝香石斛多糖含量随培养时间的增加而提高，0～40d增长速率较为缓慢，40～80d增长较快，之后的多糖含量又开始趋于平缓。中国8/vie　　关键词：麝香石斛（DendrobiumparishiiRchb.f.）；组织培养；生长效应；多糖　　中

2、图分类号：S567.9+1文献标识码：A：0439-8114（2017）06-1090-03　　DOI：10.14088/j.ki.issn0439-8114.2017.06.024　　Abstract：DendrobiumparishiiRchb.f.isDendrobiumprotospecies，entalandmedicinalvalue.Byusingtissueculturetechniques，thebestconcentrationof6-BAandNAAforthegroalconditions，theplantletsechanges.

3、Theresultsshoeadding，andthegroparishiiRchb.f.；tissueculture；groSparishiiRchb.f.）是原种石斛，不仅具有很高的观赏价值，而且还有重要的药用价值。麝香石解有效药用成分主要是多糖、生物碱、类黄酮、菲类化合物等物质。其中含量最多的是生物碱和多糖[2]。多糖是麝香石斛中最重要的药用成分，也是自然界中最多的一种有机高分子化合物，不仅可以提高免疫功能，还可以抗病毒、降血糖、抗肿瘤等[3]。许多研究都证实了以组织培养物代替原植物做药用的可行性，顾慧芬等[4]通过研究发现，铁皮石斛组培苗和野生品的

4、多糖类型与含量基本是相同的；高建平等[5]研究报道，铁皮石斛组织培养物原球茎药用作用与原药材相似；何铁光等[6]也证明，铁皮石斛类原球茎的多糖含量与野生品相近，药理作用相同。试验利用组织培养技术，通过调节不同植物激素浓度配比进行培养基配方优化，在最适培养基的基础上对麝香石斛进行试管培养，并在其不同生长阶段测定多糖含量，以期建立并优化麝香石斛试管苗培养体系，研究其生长过程中多糖的积累规律，为提高多糖含量及大规模生产有效药用成分提供技术参数，同时也为石斛多糖合成机理的研究提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1材料　　选用继代多次、具有稳定形态特征和生长速率的

5、麝香石斛试管苗为外植体，由天津农学院植物细胞工程中心提供。试剂、仪器由天津农学院农学与资源环境学院中心实验室提供。　　1.2麝香石斛最适生长培养基筛选　　在麝香石斛�M织培养过程中，以MS培养基为基本培养基，添加蔗糖30g/L、琼脂6.5g/L、活性炭2g/L，通过调整植物激素含量，筛选出最适合麝香石斛试管苗生长的培养基，激素浓度配比见表1。每处理做30次重复，观察一段培养时间（分别是20、40、60、80、100d）内麝香石斛试管苗的变化情况，选取最适合麝香石斛试管苗生长的激素浓度配比。　　1.3多糖测定　　各个待测材料的鲜样先用去离子水洗净，再用滤纸吸

6、干水分，称重得鲜重。在烘箱里以105℃对麝香石斛材料杀青15min，再将其置于80℃恒温烘箱中烘至恒重；接着用研钵研碎，称重得干重，然后分别装入样品袋，贴上相应的标签，放入干燥器中保存。采用苯酚-浓硫酸法对多糖含量进行测定。　　1.3.1标准曲线参照李满飞等[7]的方法完成麝香石斛多糖标准曲线绘制。先把在105℃烘箱中干燥至恒重的葡萄糖标准品称取0.1g，用去离子水定容于1000mL的容量瓶中。得到0.1mg/mL葡萄糖溶液，再分别精确吸取0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.60、0.80mL样品加到试管中，都加入去离

7、子水到2.0mL刻度。然后各加入苯酚试剂（10g苯酚定容在150mL的容量瓶中）1.0mL，摇匀；迅速加入浓硫酸5.0mL，摇匀，放置5min，置沸水浴中加热15min后，冷水迅速冷却到室温。另外，用去离子水2.0mL进行同法操作，作为空白对照。在紫外分光光度计的波长490nm处测各葡萄糖标准品溶液的吸光度，以吸光度值对浓度绘制标准曲线，进行线性回归，求出标准曲线方程。