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时间:2018-07-07
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1、麝香石斛组织培养过程中生长效应及多糖含量变化摘要:麝香石斛(DendrobiumparishiiRchb.f.)是原种石斛,具有很高的观赏价值和药用价值。试验利用组织培养技术筛选培养基合适的激素浓度,在最优条件下观察麝香石斛试管苗7~108d的生长情况,分析麝香石斛不同生长阶段植物多糖含量的变化情况和积累规律。结果显示,麝香石斛多糖含量随培养时间的增加而提高,0~40d增长速率较为缓慢,40~80d增长较快,之后的多糖含量又开始趋于平缓。中国8/vie 关键词:麝香石斛(DendrobiumparishiiRchb.f.);组织培养;生长效应;多糖 中
2、图分类号:S567.9+1文献标识码:A:0439-8114(2017)06-1090-03 DOI:10.14088/j.ki.issn0439-8114.2017.06.024 Abstract:DendrobiumparishiiRchb.f.isDendrobiumprotospecies,entalandmedicinalvalue.Byusingtissueculturetechniques,thebestconcentrationof6-BAandNAAforthegroalconditions,theplantletsechanges.
3、Theresultsshoeadding,andthegroparishiiRchb.f.;tissueculture;groSparishiiRchb.f.)是原种石斛,不仅具有很高的观赏价值,而且还有重要的药用价值。麝香石解有效药用成分主要是多糖、生物碱、类黄酮、菲类化合物等物质。其中含量最多的是生物碱和多糖[2]。多糖是麝香石斛中最重要的药用成分,也是自然界中最多的一种有机高分子化合物,不仅可以提高免疫功能,还可以抗病毒、降血糖、抗肿瘤等[3]。许多研究都证实了以组织培养物代替原植物做药用的可行性,顾慧芬等[4]通过研究发现,铁皮石斛组培苗和野生品的
4、多糖类型与含量基本是相同的;高建平等[5]研究报道,铁皮石斛组织培养物原球茎药用作用与原药材相似;何铁光等[6]也证明,铁皮石斛类原球茎的多糖含量与野生品相近,药理作用相同。试验利用组织培养技术,通过调节不同植物激素浓度配比进行培养基配方优化,在最适培养基的基础上对麝香石斛进行试管培养,并在其不同生长阶段测定多糖含量,以期建立并优化麝香石斛试管苗培养体系,研究其生长过程中多糖的积累规律,为提高多糖含量及大规模生产有效药用成分提供技术参数,同时也为石斛多糖合成机理的研究提供理论依据。 1材料与方法 1.1材料 选用继代多次、具有稳定形态特征和生长速率的
5、麝香石斛试管苗为外植体,由天津农学院植物细胞工程中心提供。试剂、仪器由天津农学院农学与资源环境学院中心实验室提供。 1.2麝香石斛最适生长培养基筛选 在麝香石斛�M织培养过程中,以MS培养基为基本培养基,添加蔗糖30g/L、琼脂6.5g/L、活性炭2g/L,通过调整植物激素含量,筛选出最适合麝香石斛试管苗生长的培养基,激素浓度配比见表1。每处理做30次重复,观察一段培养时间(分别是20、40、60、80、100d)内麝香石斛试管苗的变化情况,选取最适合麝香石斛试管苗生长的激素浓度配比。 1.3多糖测定 各个待测材料的鲜样先用去离子水洗净,再用滤纸吸
6、干水分,称重得鲜重。在烘箱里以105℃对麝香石斛材料杀青15min,再将其置于80℃恒温烘箱中烘至恒重;接着用研钵研碎,称重得干重,然后分别装入样品袋,贴上相应的标签,放入干燥器中保存。采用苯酚-浓硫酸法对多糖含量进行测定。 1.3.1标准曲线参照李满飞等[7]的方法完成麝香石斛多糖标准曲线绘制。先把在105℃烘箱中干燥至恒重的葡萄糖标准品称取0.1g,用去离子水定容于1000mL的容量瓶中。得到0.1mg/mL葡萄糖溶液,再分别精确吸取0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.60、0.80mL样品加到试管中,都加入去离
7、子水到2.0mL刻度。然后各加入苯酚试剂(10g苯酚定容在150mL的容量瓶中)1.0mL,摇匀;迅速加入浓硫酸5.0mL,摇匀,放置5min,置沸水浴中加热15min后,冷水迅速冷却到室温。另外,用去离子水2.0mL进行同法操作,作为空白对照。在紫外分光光度计的波长490nm处测各葡萄糖标准品溶液的吸光度,以吸光度值对浓度绘制标准曲线,进行线性回归,求出标准曲线方程。
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