竹节人参中蛋白质提取工艺研究

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1、竹节人参中蛋白质提取工艺研究【摘要】　　目的研究竹节人参蛋白质提取最佳生产工艺。方法采用单因素和L9（34）正交实验，以竹节人参蛋白质得率为指标，考察了氢氧化钠溶液的浓度、用量、提取时间和提取次数对提取效果的影响。结果氢氧化钠浓度为0.15mol/L，用量为样品体积的20倍，提取时间1.5h，提取3次为最佳工艺。结论该工艺合理，重复性好，可为竹节蛋白质提取工艺的确定提供实验依据。【关键词】竹节人参蛋白质单因素递变正交实验工艺条件　　Abstract:ObjectiveTostudytheextractionpr

2、ocessofproteinfrompanaxjaponicus.MethodsUseorthogonaldesignL9（34）,andtaketheproteinrateastheindex，definitethebestconditionofproteinprocess.ResultsThebestprocessconditionol/LSodiumhydroxide,20timesamountofsamples,theextractiontimees.ConclusionThisprocessisthe

3、bestanditcanbeusedforextractionofPanaxjaponicusprotein.　　Keyent;Craftconditions　　竹节人参属五加科植物，别名竹节三七、竹节参、白三七、北三七、大叶三七［1～3］。具有滋补强壮、散瘀止痛、止血祛痰等功能，兼具我国北药人参和南药三七之功效，在民间有“草药之王”的美誉，属我国特有珍贵中药材资源。　　湖北恩施是世界第一高硒地区［4］，生长于这一地区的竹节人参由于其富含硒而药效独特，疗效显著［5］，现已进行大规模的种植，资源十分丰富。现代药理

4、学研究表明，竹节人参主要活性物质为皂苷类、多糖、氨基酸及少量的挥发性油等［6］。目前，在对竹节人参活性成分进行提取的同时，浪费了大量竹节人参的含硒有效成分。为了充分利用宝贵的富硒竹节人参资源，笔者选择了生长在高硒地区的竹节人参为研究对象，系统研究了竹节人参中各活性成分及有效成分的提取工艺，为综合利用竹节人参提供理论依据。本文旨在以超声提取皂苷后的残渣为原料，通过单因素和正交实验，探讨残渣中蛋白质最佳提取工艺。　　1器材与方法　　1.1材料　　竹节人参由湖北省中药材研究所提供，为家种4年生的竹节人参根。在以甲醇为

5、溶剂，超声提取竹节人参皂苷后的残渣为本实验的原料。　　1.2仪器　　AVANTI30高速冷冻离心机(美国贝克曼公司)；S53/54全波长分光光度计。　　1.3实验方案设计　　1.3.1溶剂的选择控制样品与提取溶剂的体积约比为1∶20，分别用水，0.1mol/L氯化钠溶液，0.1mol/L的盐酸及0.1mol/L氢氧化钠溶液作为溶剂于常温下进行提取，以蛋白质的得率为指标，选择最佳溶剂。　　1.3.2单因素实验本实验以溶剂的浓度、溶剂用量、提取时间及提取次数作为影响竹节人参蛋白质得率的单因素，设置各因素不同的水平，

6、找出不同因素对蛋白质得率的影响规律。　　1.3.3正交实验以单因素实验的结果为参考，进行溶剂的浓度、溶剂用量、提取时间及提取次数4因素3水平正交实验设计方案，因素水平表（见表1）。以蛋白质的得率为指标，通过L9（34）正交实验确定最佳的提取条件。表1正交设计因素水平（略）　　1.4样品处理提取竹节人参皂苷的残渣置鼓风干燥箱中60℃下烘干，密封置于干燥器中备用。　　1.5蛋白质的提取与分离分别用水、0.1mol/L氯化钠溶液、0.1mol/L的盐酸及0.1mol/L氢氧化钠溶液作为溶剂，对样品中的蛋白质进行提取，

7、得到相应的溶液即为水溶蛋白质、盐溶蛋白质、酸溶蛋白质及碱溶蛋白质。然后在水溶蛋白、盐溶蛋白、酸溶蛋白及碱溶蛋白的提取液中加入硫酸铵至饱和，4℃静置过夜，离心，取沉淀透析至透析液中加饱和氯化钡无沉淀生成时，再分别用蒸馏水、0.1mol/L氯化钠、0.1mol/L盐酸及0.1mol/L氢氧化钠溶液充分溶解后定容，备用。　　1.6蛋白质得率的计算蛋白质得率η=100×(m1/m2)，其中m1为从样品中所提取出的蛋白质的质量，m2为样品的质量。　　1.7测定方法蛋白质含量测定用考马斯亮蓝G-250显色，595nm测吸光

8、度值，用牛血清蛋白制作标准曲线，曲线回归方程Y=507.13X-0.0764，相关性系数r=0.9986。　　2结果　　2.1溶剂的选择在选定的条件下，用水、0.1mol/L氯化钠溶液、0.1mol/L的盐酸及0.1mol/L氢氧化钠溶液作为提取溶剂，分别从样品中提取蛋白质，然后测定并计算出蛋白质的得率，其结果如表2所示。由表2可知，用氢氧化钠作提取溶剂，蛋白质的得率都明显地高于其它提