精子染色质扩散实验检测精子dna 碎片与宫腔内人工授精妊娠率的关系论文

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1、精子染色质扩散实验检测精子DNA碎片与宫腔内人工授精妊娠率的关系论文曹晓敏苏园园何茜冬郑轶群林仲秋【摘要】目的：探讨精液DNA碎片与宫腔内人工授精妊娠率的关系。方法：收集分析70例不育不孕患者共88个IUI治疗周期，精子染色质扩散(SCD)实验分析精子DNA碎片，苯胺蓝染色法评价精子核成熟度，并按妊娠结局分成妊娠组与非妊娠组，比较各组间精子DNA碎片比值、精子核成熟度和IUI妊娠率的关系。结果：非妊娠组SCD小光晕和无光晕精子(精子DNA碎片)比值平均为(28.3±10.6)%,非妊娠组明显高于对照组(12.0±5.9)%(P0.05);而大光晕和中

2、光晕精子比值非妊娠组明显低于对照组(P0.05);非妊娠组组苯胺蓝染色阳性率明显高于对照组。结论：非妊娠组患者核成熟度异常的精子、精子DNA碎片比例增高。【关键词】复发性流产;精子;DNA损伤宫腔内人工授精(intrauterineinsemination,IUI)是将洗涤处理过的精子悬液通过导管直接注入子宫腔内，使精卵自然结合达到妊娠生育目的的一种辅助生育技术，其适用人群广泛。影响IUI成功的因素诸多，目前尚无定论。大部分研究主要集中在女方年龄、不孕的年限、授精时机及次数、用药方案、局部盆腔结构、子宫内膜厚度、输卵管壶腹部的直径、输卵管伞端距宫角的

3、距离、精子质量与IUI妊娠率的关系1～3。关于精子质量与IUI妊娠率的研究通常是在常规精液分析水平上进行。其提供的信息不能很好评估精子的质量。在预测妊娠结局方面的价值十分有限。本课题拟通过对精子DNA完整性、精子核成熟度的检测来分析精子质量与IUI妊娠率的关系4.freela公司。1.3标本采集受检者应禁欲3～7d，用手淫或体外排精法收集精子，标明采集的时间，置37℃平板上液化后进行检测。1.4SCD实验根据文献5，6，精液标本处理：精液标本用磷酸盐缓冲液(pH6.8)调至10×106/ml1000rpm10min，弃精浆，精子沉渣用磷酸盐缓冲液(p

4、H6.8)调至1×106～10×106/ml，取0.3ml处理好的精液与0.7ml1%低熔点琼脂凝胶混匀，37℃孵育;吸取50ul上述精子混合液滴在经过0.65%正常熔点琼脂预处理过的载玻片上，盖上22mm×22mm盖玻片4℃放置5min。精子变性及裂解：小心去除盖玻片，室温(22℃左右)将标本载玻片浸入0.08mol/l的盐酸(HCL)内变性7min;然后浸入精子裂解液内(pH7.3)20min;再移入缓冲液中3min，脱水。将标本载玻片依次放入70%、90%和100%的乙醇中脱水。所有操作过程均要求载玻片(标本)处于水平状态。空气自然干燥后加入4

5、′，6二脒基吲哚(DAPI)染色，荧光显微镜下观察结果。1.5精子核蛋白组型检测精液液化并记数，洗涤调整精子密度至40×106/ml，取精液1ml，1000g离心3min，去上清液，重复3次，去除精浆加入1ml粘合液，取5ul涂片，空气干燥，加固定液固定90s，冲洗玻片，脱色、封片。镜检:涂片经苯胺蓝染色后，显微镜下高含赖氨酸的精子核呈蓝色，颜色分布基本均匀，一般在精子核后半部分着色较深，顶体部分蓝色较浅，大部分精子不显色，显蓝色的为阳性，不显色的为阴性，每个标本计数200个精子。2统计学处理数据输入计算机SPSS(12.0版)软件，经t检验进行统

6、计处理。P0.05认为有统计学差异。3结果3.1DNA完整性检测结果SCD实验普通光学显微镜图片见图1。计数500个精子，观察精子光晕大小。根据光晕与精子头部横径的比例，粗分为大、中、小和无光晕4个等级，大和中光晕表示精子DNA完整无碎片，小和无光晕表示精子DNA断裂为碎片。小光晕以精子头直径≤1/4为判断标准;中光晕精子头直径1/4，而精子头直径≤2/3;大光晕精子头直径2/3。精子SCD实验显示大、中、小光晕和无光晕精子的比例，见表1。非妊娠组患者SCD小光晕和无光晕精子比值平均为28.3±10.6%，对照组(12.0±5.9)%，两组比较差异有

7、统计学意义(P0.05)。大光晕和中光晕精子比值在IUI妊娠组和对照组分别为(72.6±5.3)%和(60.7±12.5)%，两组比较差异有统计学意义(P0.05)。A为妊娠组：1～2为大光晕的精子，A3～5为中光晕的精子B为非妊娠组：1～2为小光晕的精子，B3～5为无光晕的精子图1SCD实验检测两组精子DNA碎片结果表1两组SCD大、中、小光晕和无光晕精子的比例3.2精子核蛋白组型检测对两组70例标本进行苯胺蓝染色，非妊娠组苯胺蓝染色阳性率明显高于对照组，两组差异具有统计学意义(P0.05)，见表2。表2两组苯胺兰染色阳性率平均值比较4讨论目前关于

8、女方因素对IUI妊娠率影响的研究比较深入并形成一些共识。而精子质量与IUI妊娠率的研究通常是在常规精液分析水