多器官功能障碍综合征时胃肠cajal间质细胞形态学变化

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1、多器官功能障碍综合征时胃肠Cajal间质细胞形态学变化[摘要]目的探讨多器官功能障碍衰竭综合征(MODS)大鼠胃肠cajal间质细胞(interstitialcellsofcajal，ICC)形态学变化及MODS胃肠慢波活性减弱机制。方法Wistar大鼠17只，分为正常组和MODs组。对各组取胃体、胃窦、小肠标本，用免疫荧光染色法观察ICC在胃肠道的分布，并用电镜观察ICC的超微结构变化。结果与正常组比较，MODS组胃肠肌间神经丛ICC的荧光染色呈间断分布，条带样完整结构消失，细胞间出现较大间隔，细胞突起不明

2、显，细胞数量很少。电镜下见MODS组ICC细胞核皱缩，异染色质趋边，胞膜泡状化，线粒体数量减少，次级溶酶体增多，与邻近平滑肌细胞、神经末梢和其他ICC之间的连接减少或消失。结论MODS可引起胃肠起搏区域ICC数量减少和超微结构改变，直接影响细胞间信号传导，使慢波活性下降，引起胃肠运动功能障碍。[关键词]Cajal间质细胞；多器官功能障碍综合征；胃肠运动障碍近年来，胃肠道已成为多器官功能障碍综合征(multipleorgandysfunction8syndrome，MODS)防治的研究热点，被认为是促发MODS

3、的重要靶位之一[1]。MODs可引起胃肠运动功能障碍，继而加重病情。Cajal间质细胞(interstitialcellsofCajal，ICC)作为胃肠道的起搏细胞，在胃肠动力变化中的作用不可忽视。本实验对MODS模型大鼠胃肠道ICC的形态学变化进行研究，以进一步探讨MODS致胃肠运动障碍的产生机制。1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验仪器Bio-RadRadiance2000激光扫描共聚焦显微镜(USA)；KRYOSTAT1720冰冻切片机(Leitz，German)；LKB-Nove超薄切片机(Sw

4、eden)；JEM-1010透射电镜(Japan)。1.1.2实验试剂c-Kit兔抗大鼠多克隆IgG抗体(c-19，SantaCruz，Biotech，California，USA)；FITC-山羊抗兔IgG抗体(Signa，USA)；山羊血清(北京中山试剂公司)。1.1.3实验动物和分组健康Wistar大鼠(3～4个月龄)17只，由天津市医学实验动物中心提供。雌雄各半，体重(206±26)g，分为正常对照组(A组，6只)和细菌性腹膜炎致MODS模型组(B组，11只)。1.2实验方法1.2.1MODS模型的制

5、作大肠杆菌(E.coli.，0127：H6，中国医学科学院北京生物鉴定所)增菌后制成6×10[8]8cfu/ml混悬液，加入质量分数为10％的BaS0[4](W/V)佐剂，混匀。大鼠禁食(不禁水)24h后，在无菌条件下，A组每只腹腔注射1ml生理盐水；B组腹腔注射1mlE.coli.混悬液，制造细菌性腹膜炎致MODS动物模型[2]。1.2.2标本的取材和固定造模24h后，两组大鼠均断颈处死。取胃体、胃窦和小肠新鲜组织标本行冰冻切片；另取三部位标本去除黏膜和黏膜下层，用2．5％戊二醛固定。1.3免疫荧光染色新鲜

6、组织包埋后，-25℃冰冻切片(6μm)；4℃丙酮固定20min；用0.01mmol/L磷酸盐缓冲溶液(phosphate-bufferedsaline，PBS)冲洗；山羊血清(1:10，PBS稀释)室温孵育30min后弃去；滴加c-19(1:200，PBS稀释)，37℃孵育1h，4℃过夜；PBS冲洗；滴加FITC-山羊抗兔IgG抗体(1:50，PBS稀释)，37℃避光孵育1h；冲洗后封片。阴性对照实验用PBS代替一抗，余操作步骤同上。共聚焦显微镜观察结果并采集图像。1.4电镜标本制作固定后的组织切成1mm×2

7、mm小块；含6％蔗糖的0.1mmol/LPBS冲洗；1％O[s]O[4]后固定；梯度序列乙醇脱水；1％醋酸双氧铀阻滞染色；包埋后半薄切片(1～2,μm)定位；超薄切片(50～70mm)；铀-铅双染色；透射电镜观察。2结果82.1免疫荧光法下胃肠肌间神经丛ICC(myentericICC，IC-MY)分布A组胃肠Ic-MY均呈连续条带状分布，细胞分布均匀，细胞间相互联系紧密；高倍视野下可清楚看出似梭形的胞体，细胞突起；细胞数量很多。见图1。B组胃肠IC-MY呈间断分布，条带样完整结构消失，细胞分布不均匀，细胞间

8、出现较大间隔；高倍视野下可清楚看出梭形的胞体，细胞突起不明显；细胞数量很少，荧光强度减弱。见图2、图3。2.2电镜下lC-MY超微结构A组细胞核大，圆形或卵圆形，染色质分散，结构清晰；胞质少，富含细胞器，包括发达的滑面内质网和粗面内质网、大量线粒体、核糖体和发育良好的高尔基器，主要集中在突起内；具有基膜，主要分布在细胞膜下，两部位之间有许多腔洞；胞浆内随处可见成束的微丝和中间丝，未见粗丝；可见电致密