沙门菌分离鉴定标准程序

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1、附件一：沙门菌分离鉴定标准程序（一）检验程序图Carry-Blair运送培养基采集保存粪便标本本SBG增菌液37℃增菌18-24小时接种科玛嘉沙门菌显色培养基或SS培养基36℃±1℃18～24小时挑取紫色、淡紫色菌落（科玛嘉）或无色透明、中心黑色菌落（SS）3-5个转种KIA、MIU36℃±1℃18～24小时选K/A，产气+，H2S+／-，动力+，靛基质-，尿素-菌落进行ONPG鉴定试验36℃±1℃18～24小时符合菌落接种于哥伦比亚琼脂平板（“O”）和软琼脂平板（“H”）36℃±1℃18～24小时做O多价、O因子及H

2、相血清学诊断，于SwarmAgar琼脂平板进行相应“H2相”诱导36℃±1℃18～24小时做H2相血清诊断，凝集阴性再次进行诱导或U型管诱导36℃±1℃18～24小时血清凝集结果报告菌株保存（二）分离、鉴定标准操作程序1．SBG增菌样品在SBG增菌培养基中36±1℃增菌16小时。2．可疑菌落分离⑴取增菌培养液一环接种沙门菌科玛嘉显色培养基或SS培养基上36±1℃培养过夜；⑵挑取紫色、淡紫色菌落（科玛嘉）或周边无色透明、中心黑色菌落（SS）转种KIA、MIU生化筛选培养基，36±1℃培养过夜；⑶挑取K/A，产气+，H2S

3、+/-，动力+，靛基质-，尿素-的反应管菌株，进行ONPG鉴定试验，阴性者进行血清学凝集试验。3．血清玻片凝集试验⑴符合菌株接种于哥伦比亚琼脂平板及软琼脂平板表面中央，36±1℃培养过夜。⑵哥伦比亚琼脂平板菌落进行O多价、O因子血清凝集，定O抗原型；⑶取软琼脂周边扩散菌苔做H相多价、单价血清诊断，确定H1相抗原；⑷H1相凝集阳性者，用该相诱导血清血清1滴于6cm平板中，倾入50℃8mlSwarmAgar琼脂，轻柔混匀，放置待凝固；盖在上面36±1℃培养过夜,诱导相应的H2相；⑸从软琼脂边缘挑取少许菌苔，点种于Swarm

4、Agar软琼脂平板软琼脂中央表面，36±1℃培养过夜；⑹证实已知的O相与H相结果，参照沙门菌血清分型表，挑取SwarmAgar软琼脂呈扩散生长的菌苔边缘，依据常见“血清模式”诊断第2相，若仍不凝集再行诱导或U管诱导。⑺沙门菌分型诊断血清的品牌认可度和良好的使用习惯和诊断结果之间有很大的关系，有条件的实验室准备2套以上（其中包含1套进口血清）血清用于疑难菌株的血清比对。⑻推荐使用规范格式的沙门菌血清型的中英文报告方式。例：检出肠炎沙门菌（血清型）SalmonellaentericaserovarsEnteritidis(

5、S.Enteritidis)。4．生化鉴定使用API20E生化编码鉴定试验。5．报告结果根据2008年第9版Kauffman-White沙门菌抗原表，生化和血清学符合沙门菌特征者报告最终的血清型。少数生化和血清变种的报告须经国家级专业实验室最终鉴定报告。6.菌株保存和定期上送4℃半固体培养基保菌菌种至少2套（穿刺接种后36℃培养过夜即可）或30%甘油肉汤冻存管-70℃保存菌株至少2套。按照方案要求定期上送。