冷浸法提取丹参脂溶性部位工艺研究论文

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1、冷浸法提取丹参脂溶性部位工艺研究论文林忠泽，刘东辉，关世侠【摘要】【目的】探讨冷浸法提取丹参脂溶性部位的最佳工艺条件。【方法】采用高效液相色谱(HPLC)法为测定方法，以丹参酮ⅡA提取量为指标，考察不同浓度乙醇和粉碎对丹参酮ⅡA提取率的影响，并用正交试验法进一步优选提取条件。【结果】最佳提取工艺条件为采用8倍量体积分数95%乙醇冷浸提取2次(每次3h)，在这种条件下，可获得较高的丹参酮ⅡA提取率。【结论】此工艺条件简单、稳定.freeliltiorrhizaBge.的干燥根及根茎，具有祛瘀止痛、活血通经、清

2、心除烦的功效1。现代医学认为，丹参具有扩张冠状动脉，增加冠状动脉血流量，防止心肌缺血和心肌梗死，加快微循环血流，促进毛细血管网开放，抑制心肌收缩，减少能量消耗，扩张血管，降低胆固醇、血脂，抑制凝血，激活纤溶，稳定红细胞膜，提高缺氧耐受力，增加肝脏血流量，保护肝损伤细胞，抗肝纤维化，抑制中枢神经系统以及消炎抗菌等作用2。其脂溶性成分具有抗菌、抗炎、抗氧化等药理作用3。目前提取丹参脂溶性成分的方法主要有乙醇回流法和超临界CO2萃取法4。丹参酮ⅡA是丹参脂溶性主要成分之一，丹参酮ⅡA对热敏感，在提取制备过程中容易

3、被破坏5，超临界CO2萃取法成本较高。冷浸提取法工艺简单，可室温下操作且成本低。本文对冷浸法提取丹参中的脂溶性部位工艺进行系统研究，旨在优选最佳提取工艺条件，现报道如下。1仪器和试药LC10AT高效液相色谱仪(日本岛津);SPD10A紫外检测器(日本岛津);N2000工作站;丹参酮ⅡA对照品购自中国药品生物制品检定所(批号：0766200011);丹参购自山东药材市场，鉴定人为广州中医药大学中药学院关世侠副教授;甲醇为色谱纯，购自SIGMA公司;纯水以双蒸法自制。2方法与结果21对照品溶液的制备取丹

4、参酮ⅡA对照品约10mg，精密称定，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀;精密量取1mL，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。22色谱条件色谱柱：KromasilC18柱(250mm×46mm);流动相：甲醇—水(体积比为75∶25);流速：1mL/mim;检测波长：270nm。在此条件下测定丹参酮ⅡA对照品及丹参提取物。23标准曲线分别吸取对照溶液25、50、75、100、150、200μL，注入液相色谱仪。以丹参酮ⅡA进样量(X)对峰面积(Y)进行线性拟合，丹参酮ⅡA回归方

5、程为Y=4×106X，r=09994。结果表明：丹参酮ⅡA在00392~03136μg范围内线性关系良好。24溶剂乙醇浓度选择取8份丹参粉末(过3号筛)，每份约03g，精密称定后将每2份分成1组，分别精密加入10mL体积分数为65%、75%、85%、95%的乙醇，冷浸5h，滤过，收集续滤液，精密量取1mL置10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取5μL注入液相色谱仪进行测定。计算药材提取物中丹参酮ⅡA含量：p丹参酮ⅡA=m丹参酮ⅡA(g)/m药材(g)×100%。表1结果显示，体积分数

6、85%乙醇提取丹参酮ⅡA含量比体积分数95%乙醇提取丹参酮ⅡA含量低125%,故本实验选择体积分数95%乙醇作为提取溶剂。25粉碎提取试验取同一批丹参药材，一份粉碎(过3号筛)，一份切碎，再分别称取3份，每份50g，加8倍量体积分数95%乙醇冷浸过夜，滤过，精密吸取1mL置10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取5μL注入液相色谱仪测定。结果见表2。两组间比较无显著性差异(P005)。所以从节省能源上考虑，丹参药材不必粉碎成粉末，只需切碎后进行投料。26正交试验选用体积分数95%乙醇作溶

7、剂，取丹参50g，共9份，按正交条件进行试验，结果见表3、表4表1溶剂乙醇浓度选择试验结果表2粉碎提取试验结果表3因素水平表27方差分析将正交试验结果进行方差分析。表5结果显示，A(乙醇用量)、B(冷浸次数)、C(冷浸时间)影响冷浸提取效果的因素顺序为：BCA，B因素对提取有显著性影响，A因素和C因素对提取无显著性影响，考虑到节省能源和时间以有利于工业生产，因此确定提取工艺为A2B2C2，即用8倍量体积分数95%乙醇冷浸提取2次，每次3h。28工艺验证试验为考察上述优选提取工艺的稳定性，取丹参3份，每份

8、50g，按该工艺条件即药材用8倍量体积分数95%乙醇冷浸提取2次，每次3h，分别测定丹参酮ⅡA提取量。结果见表6。按正交实验优先的最佳工艺进行验证试验，3次结果都处于较高水平，这说明该提取工艺是稳定可行的。表4正交水平表表5正交方差分析表6工艺验证试验结果3讨论丹参脂溶性部位传统提取方法是乙醇加热回流，有效成分容易受破坏，而且提取得膏率高，影响药物治疗作用及制剂载药量6;超临界CO2萃取能在低温下提取，且得膏率低