血晶素诱导ho1表达增加及对急性肺损伤小鼠mmp2、mmp9 mrna的影响的论文

《血晶素诱导ho1表达增加及对急性肺损伤小鼠mmp2、mmp9 mrna的影响的论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、血晶素诱导HO1表达增加及对急性肺损伤小鼠MMP2、MMP9mRNA的影响的论文血晶素诱导ho1表达增加及对急性肺损伤小鼠mmp2、mmp9mrna的影响【关键词】ho1;急性肺损伤;mmp2;mmp9【摘要】目的通过复制急性肺损伤模型，探讨血晶素诱导血红素加氧酶1(hemeoxygenase1，ho1)的表达对于小鼠急性肺损伤的影响。方法利用逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹方法检测急性肺损伤小鼠肺组织基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinas2，mmp2)、

2、mmp9mrna和ho1蛋白的表达。结果血晶素加脂多糖组和对照组比较，ho1蛋白表达明显增高(p<0.05);脂多糖组与对照组比较，mmp2mrna和mmp9mrna表达差异有统计学意义(p<0.05)，血晶素加脂多糖组与对照组比较，差异无统计学意义(p>0.05)。结论ho1降低了急性肺损伤小鼠肺组织mmp2、mmp9mrna的表达，对于小鼠的急性肺损伤有保护作用。【关键词】ho1;急性肺损伤;mmp2;mmp9　expressionofhemin-inducedho

3、1anditseffectsonmmp2mrna,mmp9mrnainmicein-induced(hemeoxygenase1)ho1onmiceodelofacutelunginjury.methodsthertpcrandethodsatrixmetalloproteinase2(mmp2),mmp9mrnaandho1inmicein+lpsgroupmp2mrnaandmmp9mrnabetmp2mrnaandmmp9mrnabetin+lpsgroupgroupandc

4、ontrolgroup(p>0.05).conclusionho1candomp2andmmp9mrnainmiceice.　　【keymp2;mmp9　　血红素加氧酶(hemeoxygenase,ho)是血红素代谢过程中的起始酶和限速酶，可以降解血红素。.在人和哺乳动物体内共有3种ho的同工酶：ho1、ho2、ho3。其中ho1为诱导型，又称为热休克蛋白32，研究发现血晶素可以诱导ho1的高表达[1]。急性肺损伤(acutelunginjury,ali)是以肺血管内皮细胞及肺泡上皮

5、细胞广泛损伤为病理特征的一种失控的炎性反应，是全身炎性反应综合征所致多器官功能障碍综合征的肺部表现。本研究通过复制脂多糖(lipopolysaccharide，lps)诱导的急性肺损伤小鼠模型，检测血晶素诱导ho1的高表达对肺组织中基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinas2，mmp2)、mmp9mrna的影响，为临床ali的防治提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1试剂：lps和血晶素为sigma公司产品;trizol试剂为invitrogen公司产品;re

6、versetranscriptionsystem和gotaqgreenmastermix均为promega公司产品;dnamaker为北京天根生化科技有限公司产品;兔抗鼠ho1多克隆抗体美国santacruz公司产品。　　1.1.2实验动物：雄性balb/c小鼠(清洁级)40只，10～12周龄，体重19～22g，由河北省实验动物中心提供。　　1.2方法　　1.2.1实验分组与给药方法：随机分为4组：对照组、脂多糖组、血晶素加脂多糖组和血晶素组，每组10只。脂多糖组：腹腔注射脂多糖，20mg/kg;血晶素加脂

7、多糖组：腹腔注射脂多糖前2h给予血晶素，30mg/kg;血晶素组：腹腔注射血晶素，30mg/kg;对照组：在相同时间点注射等体积的0.9%氯化钠溶液。　　1.2.2肺组织ho1蛋白表达的in离心15min，吸取上清，分装。应用考马斯亮蓝法进行蛋白质浓度检测，其余置-80℃保存。每组取50μg样品蛋白行8%sds聚丙烯酰胺凝胶电泳后，采用水浴式电印迹方法转膜，电压90v转膜3h。取出pvdf膜，应用封闭液(5%脱脂奶粉)室温封闭1h，洗膜后加入稀释的一抗(以适当比例稀释)，4℃密封过夜。洗膜后，加入稀释的二

8、抗，37℃放置1h，再洗膜后加入显色剂进行检测，用凝胶图像成像系统拍摄实验结果，分析ho1和gapdh蛋白条带的吸光度值。用吸光度值代表ho1蛋白的表达量。　　1.2.3半定量rtpcr技术检测：每只小鼠取右侧肺叶，立即放入depc处理过高压消毒的ep管中，置入液氮罐中，用于半定量rtpcr技术检测mmp2、mmp9mrna表达。用trizol试剂提取肺组织的总rna后，检测其完整性和浓