山楂叶总黄酮对脑缺血再灌注损伤的保护作用

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1、山楂叶总黄酮对脑缺血再灌注损伤的保护作用纪影实李红曲极冰杨世杰【摘要】目的探讨山楂叶总黄酮（FMCL）对脑缺血再灌注(CIR)损伤的保护作用及其可能机制。方法采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，对其进行行为指标评分，TTC染色测定梗死范围，HE染色检测脑组织病理变化，透射电镜检测神经元超微结构变化，并检测大鼠脑组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）及一氧化氮（NO）含量的变化。结果FMCL可明显改善大鼠神经行为，缩小梗死范围，减轻脑组织病理改变，并可提高脑组织中SOD活性，降低脑组织中MDA及NO含量（P＜0.05或P＜0.01）。结论FMCL可减轻

2、CIR神经细胞损伤，其机制可能与抗自由基损伤、减轻NO神经毒性有关。【关键词】山楂叶总黄酮；脑缺血再灌注；脑梗死【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectsofflavonemixtureofcrataegusleaves（FMCL）oncerebralischemiareperfusion(CIR)injuryinrats.MethodsTheCIRmodeleasured.Thenpathologicalchangeininjurybraintissueissionelectronmicroscope.Atthesa

3、metime,thelevelsofsuperoxidedismutase(SOD),malondialdehyde(MDA)andnitricoxide(NO)inbraintissueanner（P＜0.05or0.01）.ConclusionsFMCLhasaprotectiveeffectonCIRinjury.ItsmechanismmayberelatetoantiradicalsdamageandlessentheneurotoxicityofNO.【Keyiareperfusion;Cerebralinfarction　　山楂叶总黄酮（FMCL）是从花期山楂的叶子

4、中提取的黄酮类化合物的总称，已从中分离出30余种单体。研究显示，FMCL具有多方面的药理作用，如扩张冠状动脉、强心、抗心肌缺血等〔1〕，但对脑缺血再灌注（CIR）损伤的作用尚未见报道。本实验通过模拟CIR损伤模型，研究FMCL对CIR损伤的保护作用并探讨其作用机制，为其临床应用提供实验依据。　　1材料与方法　　1.1药品及仪器　　FMCL由长春三九生物制药提供，批号030510；舒血宁（ShXN）金陵药业股份有限公司，批号030728；红四氮唑（TTC）中国医药上海化学试剂总厂，批号20031103；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)试剂盒均由南京建成生物

5、公司提供；6010紫外分光光度计由安捷伦分析仪器厂生产；GFD200半自动生化测定仪由山东高密彩虹分析仪器有限公司生产；JEM1200EX电子显微镜，日本光电株式会社。　　1.2动物分组及给药　　60只雄性CL高、中、低剂量组（100、30和10mg/kg），每日腹腔注射(ip)给药1次（前两组为相同体积的生理盐水），连续给药5d。　　1.3CIR损伤模型的制备　　于末次给药后30min，上述动物经ip水合氯醛(350mg/kg)麻醉。仰卧位固定在手术台上，行颈正中切口，分离右侧颈总动脉（CCA），再分离出颈外动脉（ECA）结扎，在ECA下方分离颈内动脉（ICA）及其小分支翼腭动

6、脉（PPA）并结扎之。结扎CCA近心端和ECA，用动脉夹夹闭CCA，并在CCA剪开一小口，将直径0.175mm的尼龙线插入约18mm，遇阻即止，阻塞大脑中动脉起始部，然后逐层缝合肌肉和皮肤，单笼饲养。术后自由进食水，2h后拔出栓线使血流再灌注22h，假手术组仅分离右侧CCA、ICA颈内动脉及ECA，其余同上。　　1.4神经功能评分　　大鼠CIR22h后进行行为指标评分，标准为：活动正常者为0分；竖毛，轻度运动低下者为0.5分；前肢屈曲运动障碍者为1.0分；行动不协调，屈曲姿势，旋转运动者为2.0分；偏瘫，不能站立和行走者为3.0分；痉挛，昏睡者为4.0分；死亡者为5.0分（术后2h以

7、上死亡者）。得分高者运动障碍明显。　　1.5脑梗死面积测定　　实验结束后，将大鼠立即断头取脑，去除小脑和低位脑干，在前联合处将脑组织行冠状切片，间隔4mm，共5片，放入2％TTC磷酸盐缓冲液(pH7.4)37℃水浴10min，正常脑组织呈深红色，梗死脑组织呈白色。将每片组织照相，选择每一切面的尾侧面，应用BI2000软件处理系统计算各部分面积，以各片非染色区面积之和与各片脑组织面积之和的百分比计算脑梗死范围。　　1.6HE染色　　实验结束后，断头取脑，脑组