红景天苷对大鼠急性心肌缺血和乳鼠心肌细胞的保护作用

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1、红景天苷对大鼠急性心肌缺血和乳鼠心肌细胞的保护作用颜天华马莹杨伟王秋娟贾莹潘志伟【摘要】目的研究红景天苷对大鼠急性心肌缺血的保护作用，以及对乳鼠心肌细胞于缺氧/复氧损伤和氧化损伤下的影响。方法以垂体后叶素（pituitrin）制备大鼠急性心肌缺血模型，观察急性心肌缺血大鼠Ⅱ导联心电图的变化。体外培养原代乳鼠心肌细胞，采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)诱导心肌细胞缺氧/复氧损伤和过氧化氢(H2O2)诱导造成氧化损伤模型。MTT法测定细胞存活率并测定乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)浓度。结果红景天苷能显著抑制垂体后叶素所造成的心电图T波

2、抬高和J点升高；能明显提高缺氧/复氧模型和氧化损伤模型下的细胞存活率，降低培养液中的LDH和CK浓度。结论红景天苷对急性心肌缺血损伤、缺氧/复氧损伤和氧化损伤均有较好的保护作用。【关键词】红景天苷急性心肌缺血心肌细胞缺氧/复氧氧化损伤红景天为景天科景天属RhodiolaL.多年生草本植物，主要生长于高寒、缺氧的地区，因此具有极强的环境适应能力和生命力。在我国红景天的应用已有悠久历史，在西藏被誉为“高原人参”，为藏族习用药材。红景天主要有效成分有红景天苷、酪醇，此外含有淀粉、蛋白质和具有生物活性的多种微量元素，国内外的研究主要集中在红景天苷

3、、红景天素和酪醇上〔1，2〕。近年来的研究结果表明，红景天具有抗肿瘤、抗衰老、抗缺氧、抗寒冷、抗辐射等多种功能。本实验研究红景天苷对急性心肌缺血损伤的影响以及对缺氧/复氧损伤和氧化损伤的心肌细胞的影响，为开发具有临床应用价值的抗心肌缺血新药提供依据。　　1器材　　1.1药品与试剂注射用红景天苷，由成都恒基医药科技有限公司提供，纯度大于90%；葛根素注射液，北京协和药厂生产；注射用盐酸地尔硫卓（合贝爽），天津田边制药有限公司进口分装；垂体后叶素注射液，上海第一生化药业有限公司生产；连二亚硫酸钠，天津市福晨化学试剂厂生产，分析纯；溴化-(4、

4、5二甲基-2-噻唑基)-2、5二苯基四氮唑(MTT)，美国sigma公司出品；乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒及肌酸激酶(CK)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；其它试剂均为市售分析纯。　　1.2仪器ECG-6511型心电图机，日本光电工株式会社出品；紫外可见分光光度计(TU-1800)，北京普析通用仪器有限责任公司出品；DG-5031型酶联免疫检测仪，华东电子集团医疗装备有限责任公司出品。　　1.3动物SD大鼠，雌雄各半，（220±20）g，清洁级；SD孕大鼠，清洁级；均由河南省实验动物中心提供，许可证号：SCXK(豫)2005-0001。

5、　　2方法　　2.1红景天苷对垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血的影响〔3〕SD大鼠70只，雌雄各半，随机分为7组。分别为正常对照组和模型组（均给予等量生理盐水），葛根素组（12.0mg/kg），地尔硫卓组（1.5mg/kg），红景天苷高、中、低剂量组（24.0，12.0，6.0mg/kg）。以上各组以不同浓度等容积给药0.5ml/kg。　　　　　将大鼠用3％的戊巴比妥钠以40mg/kg的剂量腹腔注射麻醉后，仰卧位固定，记录一段正常心电图（S点不高于基线为合格，异常者弃去不用）。静脉给药5min后尾静脉注射脑垂体后叶素0.75U/kg〔4,5

6、〕，给药容积为1.0ml/kg，注射速度为5～10s。记录注射后5，10，30s，1，2，5，10，20min的Ⅱ导联心电图，观察T波和J点的变化。　　2.2红景天苷对心肌细胞的影响　　2.2.1对缺氧/复氧（Na2S2O4）所致心肌细胞损伤的影响根据文献〔6～8〕方法体外培养原代乳鼠心肌细胞。　　取生长良好的细胞随机分为正常组（给予等量PBS液）；模型组（给予等量PBS液）；葛根素组（终浓度为10-5mol/L）；盐酸地尔硫卓组（终浓度为10-5mol/L）；红景天苷高、中、低剂量组(终浓度分别为10-4，10-5，10-6mol/L)

7、。每组6个孔，加入药物4h后除对照组外均加入Na2S2O4（终浓度为5mmol/L），刺激细胞1h。缺氧损伤1h后，换去细胞培养液为正常含血清DMEM培养液继续培养1h〔9，10〕。用MTT染色法测定96孔培养板内心肌细胞的活力(A570表示)。取培养液测定其中LDH和CK的含量。　　2.2.2对H2O2诱导心肌细胞损伤的影响〔11〕取生长良好的细胞随机分组同“2.2.1”。每组6个孔，加入药物4h后再加H2O2（终浓度为0.5mmol/L）刺激细胞4h。用MTT染色法测定96孔培养板内心肌细胞的活力(A570表示)。取培养液测定其中LD

8、H和CK的含量。　　2.3统计学处理实验数据用±s表示。采用单因素方差分析进行组间显著性比较，两组间样本均数比较采用t检验，P0.05认为有统计学差异。　　3结果　　3.1红景天苷对垂体后叶素