壬基酚与卵清蛋白的结合与鉴定的论文

《壬基酚与卵清蛋白的结合与鉴定的论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、壬基酚与卵清蛋白的结合与鉴定的论文【摘要】目的：合成壬基酚与卵清蛋白的偶联物。方法：在磷酸盐（pbs，ph=8.0）缓冲液中利用甲醛通过曼尼希反应连接壬基酚与卵清蛋白（ova）；通过抗体芯片技术与紫外扫描鉴定偶联物。结果：壬基酚与ova偶联成功，壬基酚单克隆抗体对偶联物的识别浓度小于2.68μg/ml。结论：本方法可用于壬基酚与卵清蛋白的偶联，且方法简单易实现。【关键词】壬基酚卵清蛋白甲醛　　synthesisandidentificationoftheconjugationofnonylphenolandovalbu

2、min　　p;environmentalmedicine,academyofmilitarymedicalscience,tianjin300050,china　　［abstract］objective:toconjugatenonylphenolandovalbumin（ova）.methods:nonylphenolannichreactionaldehydeinphosphatebuffer（pbs,ph=8.0）.andonoantibodyrecognizedtheconjugatelessthan2.68μ

3、g/ml.conclusion:thisisaneasymethodtoproducetheconjugateofnonylphenolsuccessfully.　　［keyin；formaldehyde　　近些年来的研究显示壬基酚是一种雌激素效应很强的环境内分泌干扰物质，相当于雌二醇的1/10000～1/1000［1，2］，而且可以在动物的脂肪组织内蓄积使其雌激素效应增强。.其雌激素效应主要体现在壬基酚可以导致动物体重和器官重量明显增加，雄性精子数量明显减少等生殖系统性能改变［37］。环境中的壬基酚主要来自壬基酚聚

4、氧乙烯醚的微生物降解产物。壬基酚聚氧乙烯醚是一种良好的非离子表面活性剂，在洗涤剂等行业中被广泛使用。并且壬基酚本身也具有非离子表面活性而被广泛是用于化工、医药、造纸和洗涤剂等行业。因此，造成水体和淤泥不同程度的污染，壬基酚性质稳定，尤其在淤泥中（有氧条件下，3周降解80%），污染区域可自水边向外延伸100英里以上［8］。其检测方法目前主要依赖色谱法，虽然国外杂志曾报导过壬基酚人工抗原及抗体的制备，但多数人工抗原的制备是以羟基为特征官能团，而将烷基衍生与蛋白相连，产生抗体［9，10］。我们对壬基酚与蛋白的偶联方法进行了深

5、入的探讨，最后在保留其两种特征官能团（19碳烷基和羟基）的前提下，成功地制备出壬基酚与卵清蛋白的偶联物。　　1材料与方法　　1.1试验材料　　1.1.1试剂与材料卵清蛋白（ova，华美生物工程公司）；壬基酚（np，aldrich公司）；40%甲醛（国产试剂）；乙酸乙酯（国产试剂）；醛基化玻片（celassociates，inc.）；cy3（amershampharmaciabiotech）；sephadexg50葡聚糖凝胶（sigma公司）；壬基酚单克隆抗体（日本友人赠送，1.75mg/ml）。　　1.1.2主要仪器

6、蛋白核酸分析仪（beckmen公司）；pixsys芯片制备仪（点印）（catesiantechnologies，inc）；genepixtm4000b扫描仪（axoninstruments，inc）；冷冻干燥仪（savant公司）。　　1.2试验方法　　1.2.1壬基酚偶联物的制备　　1.2.1.1壬基酚与蛋白的偶联曼尼希反应原理：在碱性条件下，酚羟基的临位活性很强，其上的氢很容易被取代。在pbs碱性缓冲液中利用甲醛形成甲撑将壬基酚羟基的临位与ova的氨基连接。　　1.2.1.2壬基酚与ova的偶联将400mg（约9μ

7、mol/l）ova溶于50mlpbs（ph8.0）缓冲液中，在ova溶液中加入2ml（约8mmol）壬基酚，并立即边搅拌边滴加40%甲醛溶液，甲醛滴加过量，用1mol/lnaoh维持反应液的ph值在8.0左右，有白色絮状物质出现，继续搅拌2小时。将反应液过滤得到澄清的滤液，滤液封口放入4℃冰箱过夜。　　透析袋煮沸1小时，将滤液倒入透析袋中，置于蒸馏水中透析6天，每天换1次蒸馏水。透析产物经冷冻、抽干得到白色絮状的偶联物。偶联物放入4℃冰箱保存。　　1.2.2人工抗原中ova与壬基酚偶联比例的确定准确称取ova和偶联物1

8、mg分别溶于1ml蒸馏水中备用；取20μl壬基酚加至1ml蒸馏水中制得壬基酚饱和溶液（壬基酚在水中的溶解度为6.35mg/l）。以蒸馏水为空白对照，分别取100μl上述3种溶液使用核酸蛋白分析仪进行紫外波长（220～450nm）扫描检测。由于苯环的吸收峰在280nm处，所以按下列公式粗略计算ova与半抗原的偶联比：　　偶联比=a2