促性腺激素释放激素对大鼠胰腺细胞内camp含量的影响的论文

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1、促性腺激素释放激素对大鼠胰腺细胞内cAMP含量的影响的论文作者：曹宏伟,蒲若蕾,黄威权,姚兵,陈蕾,张荣庆,姬秋和【摘要】目的：通过观察gnrh类似物（gnrhr激动剂和拮抗剂）对大鼠胰腺细胞内camp含量的影响，了解camp在gnrhr介导的信号转导通路中的作用.方法：以不同浓度gnrh类似物对原代培养的大鼠胰腺细胞进行刺激，借助放免法测定观察在体外条件下gnrh类似物对大鼠胰腺细胞内camp含量的影响.结果：在量效实验中，各浓度gnrhr激动剂均能使细胞内camp含量增加，其中10-8～10-5mol/l中4个浓度组最为明显，与对照组相比有非常显著差异（p<

2、0.01）.应用gnrhr拮抗剂（10-6mol/l）后明显抑制了激动剂组增高camp含量的作用，其camp水平与对照组比较没有显著差异（p>0.05）.在时效实验中，应用10-7mol/lgnrhr激动剂刺激细胞，从10min起细胞内camp含量即开始增多，到1h达到峰值，以后逐渐下降，8h后恢复到原水平.结论：由以上结果推测camp可能是gnrhr介导的信号转导通路中的信号分子之一.【关键词】大鼠；胰腺；促性腺激素释放激素受体；信号转导；环磷酸腺苷　　【abstract】aim:toobservetheeffectsofstimulatorsandblock

3、ersofgonadotropinreleasinghormone(gnrh)receptorsoncampproductionbyratpancreaticcellsinvitro.methods:cellcultureandradioimmunoassaypproductioninculturemediasupplementedulatecampproductioninaconcentrationdependentmannerfrom10-8to10-5mol/l,ol/l，p<0.01).thecampproductioncouldbestimulate

4、dbythegnrhagonist(10-6mol/l)inatimedependentmanner,ulationandreturnedtoitsoriginallevelat8hlater.conclusion：campmaybeoneofthesignalingfactorsinvolvedinthegnrhreceptorssignalingpathonereceptor(gnrhr）；signalingpathp　　0引言　　我们以往的研究发现，gnrh及其受体在大鼠胰腺上皮细胞均有表达［1-5］，同时功能实验证实gnrh可以影响胰腺的内、外分泌功能.那

5、么gnrhr作为胰腺细胞膜上的特异性受体，是如何将胞外刺激信号传至胞内？其信号转导通路都有哪些信号分子的参与？这些问题的研究对于深入了解gnrh对胰腺作用的分子机制具有重要意义.本研究拟通过观察gnrh类似物对大鼠胰腺细胞内camp含量的影响，了解camp在gnrh受体介导的信号转导通路中的作用.　　1材料和方法　　1.1材料rpm1640培养基，胎牛血清（fcs），胰酶（hyclone公司）；链霉素，青霉素（清华大学校医院）；gnrhagonist（［dtrp6］lhrh），gnrhantagonist（dphe2，dala6］lhrh），胶原酶ⅰ，b

6、sa（sigma公司）；camp放免检测试剂盒（北京中国原子能研究院同位素研究所）；当日生同窝sd大鼠（北京维科利华实验动物中心）.　　1.2方法　　1.2.1大鼠胰腺腺泡细胞的原代培养将等体积胰酶与胶原酶混合成细胞分离液，预热至37℃待用.乳鼠行颈椎脱臼法处死，75ml/l酒精溶液中消毒3～5min，移入超净台，剖腹，无菌条件下取胰腺组织，放入4℃hanks液中；小心去除被膜及脂肪组织，用弯头眼科剪将其剪成1mm3左右的碎块；将5ml预热的细胞分离液移入25ml锥形瓶中，37℃下消化15min（其间摇动数次）；待大块组织沉降后，40μm筛网过滤.用新鲜的细胞分离液重

7、复以上步骤2次，收集滤液，离心后重新悬浮于10mlhanks液中.在另外两个离心管中加入35mlbsa，每管溶液上轻轻移入5ml细胞悬液，100g离心5min，弃上清.重复以上步骤两次.悬浮细胞于1640培养液中，接种于25cm2培养瓶，放入体积分数50ml/lco2，37℃培养箱内培养30min，把培养液倒入另一培养瓶，其中即为较纯的上皮样细胞；隔日换液，利用时差贴壁法进行纯化，直至成纤维样细胞被去除.　　1.2.2细胞分组施加刺激因素纯化的胰腺腺泡细胞生长状态稳定后，消化分离记数细胞，接种于24孔板；待细胞生长满至孔底时（24h），更换含20ml