菠萝蛋白酶的制备及其活力测定

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1、1、防腐剂：5%苯甲酸钠溶液：取5g苯甲酸钠加蒸馏水至100ml，混匀，即得。2、沉淀剂：0.2%鞣酸溶液：取鞣酸0.6g，加乙醇至300ml，溶解混匀，即得。3、洗涤剂Ⅰ：0.1%EDTA用0.5%的EDTA稀释即得。1.5%NaCl：取NaCl12g，加纯水至800ml，混匀，即得。4、洗涤剂Ⅱ：0.5%乙酸锌：取乙酸锌2.5g，加水至500ml，混匀，即得。0.06%抗坏血酸：取抗坏血酸0.12g，加水至200ml，混匀，即得。0.5%EDTA：取EDTA1.5g，加水至300ml，混匀，即得。5

2、、洗涤剂Ⅲ：0.5%硫代硫酸钠：取硫代硫酸钠0.5g，加水至100ml，混匀，即得。0.1%L-半胱氨酸溶液10ml【配制方法：取L-半胱氨酸0.1g,加水10ml,加1mol/L盐酸溶液(浓盐酸1ml加水至12ml即得)6～8滴，最后用6mol/L的氢氧化钠试液（240g氢氧化钠加水至1000ml即得）中和至pH3～4。】扩大10倍体积。6、菠萝蛋白酶活力测定试剂：（此试剂暂不配制，看提取情况再定）0.05mol/L的磷酸缓冲液(pH7.0):取6.8g磷酸二氢钾(136.09g/mol)加水至100

3、0ml，用0.2M氢氧化钠试液调pH7.0，即得。激活剂【取6.8g磷酸二氢钾加水至1000ml，用0.2M氢氧化钠试液调pH7.0，加15mol的硫代硫酸钠(158g/mol)，加6molEDTA-2Na(374.26g/mol),现用现配。】1%酪蛋白：称取酪蛋白1克于研钵中，先用少量蒸馏水湿润后，慢慢加入0.2mol/LNaOH4ml，充分研磨，用蒸馏水洗入100ml烧杯中，放入水浴中煮沸15分钟，溶解后冷却，转移至100ml容量瓶内定容，保存于冰箱内。1mol/L氢氧化钠：去氢氧化钠40g加水至

4、1000ml，即得。也可以用6mol的稀释。器材：榨汁机、离心机(本实验室的那太不好用，申请调换)、冰箱、干燥器、研钵、剪刀、紫外分光光度计。实验流程：1、菠萝蛋白酶的提取取菠萝鲜果皮汁200g→5%苯甲酸钠2ml搅匀→4000r/min离心7min，取上清液转入干净烧杯内→缓缓加入0.2%鞣酸溶液15ml，边加边搅约15min，沉淀析出后，静置40min→虹吸除去上清废液，把酶复合沉淀物转入离心杯中→4000r/min离心5min，弃上清液，即得酶糊复合物。2、分离、洗涤和保护把提取的蛋白酶糊倒入烧杯

5、中+0.1%EDTA20ml+1.5%NaCl40ml，搅匀→4000r/min离心7min，弃上清液，得到洗涤剂Ⅰ酶复合沉淀物，转入烧杯→0.5%乙酸锌4ml，搅匀，静置5min后→加0.06%抗坏血酸6ml，搅匀，静置5min后→加1.5%NaCl4ml，搅匀，静置5min后→加0.5%EDTA4ml，搅匀，静置5min后→4000r/min离心7min，弃上清液，得到洗涤剂Ⅱ酶复合沉淀物，转入烧杯→0.5%硫代硫酸钠4ml，搅匀，静置5min后→加1%L-半胱氨酸溶液2ml，搅匀→4000r/mi

6、n离心7min，弃上清液，得到蛋白酶糊。3、冷冻、干燥：按书操作。