硝酸咪康唑搽剂微生物限度检查法的建立论文

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1、硝酸咪康唑搽剂微生物限度检查法的建立论文【摘要】目的建立硝酸咪康唑搽剂微生物限度检查法。方法测定硝酸咪康唑搽剂对大肠埃希菌等5种试验菌的回收率，对2个控制菌（铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌）的检查方法进行验证。结果用薄膜过滤法和0.1%吐温80-pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作冲洗剂检查本品的细菌总数、真菌及酵母菌计数，其试验菌回收率均达到70%以上。同样用该方法检查本品的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌，其试验组呈阳性反应，阴性菌对照组呈阴性反应。结论用薄膜过滤法联用0.1%吐温80-pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作冲洗剂可以消除硝酸咪康唑搽剂在试验条件下的抑菌作用，从而顺利检出该品

2、种所污染的各种微生物。【关键词】硝酸咪康唑搽剂；微生物限度检查；方法学验证Abstract:ObjectiveToestablishamethodofmicrobiallimittestformiconazolenitrateliniment.MethodsCentrifugalsedimentationandculturemediumdilutedmethodicrobiallimittest.ResultsTherecoveryofbacteria,yeastandmouldnegativeorganismsbranefiltrationandthepolysorbate8

3、0sodiumchloridepeptonebuffercanbeusedtotestthetotalviableaerobiccountandspecifiedorganisms(includeS.aureusandP.aeruginosa)formiconazolenitrateliniment.Keyiconazolenitrateliniment；microbiallimittest；methodvalidation微生物限度检查法是检查非规定制剂及原料、辅料受微生物污染程度的方法，检查项目包括细菌数、真菌数、酵母菌数及控制菌检查［1］。但具有抑菌成分的药品由于其抑菌

4、活性的干扰，常规检查结果不能真实地反映出药品中污染微生物的情况.freelonasaeruginosa）［CMCC(B)10104］白色念珠菌(Candidaalbicans)［CMCC(F)980011］,黑曲霉(Aspergillusniger)［CMCC(F)98003］，由广东生物研究所提供，菌种代数均为第3代。1.2培养基及试剂pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液、0.1%吐温80pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液、营养肉汤、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、虎红培养基、胆盐乳糖培养基、溴化十六烷基三甲铵琼脂、二盐酸二甲基对苯二胺试剂、PDP琼脂培养基、三氯甲烷、甘露醇氯化钠琼脂培

5、养基和革兰氏染色剂。1.3样品硝酸咪康唑搽剂，阿特维斯（佛山）制药有限公司，批号：0606950，成分：硝酸咪康唑、玫瑰麝香香精、乙醇、二甲基亚砜。2方法与结果2.1菌液制备［1］2.1.1取经37℃培养18～24h的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌与大肠埃希菌的肉汤培养物1mL，加入9mL0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释并制成每1mL中含菌数50～100cfu的菌悬液，做活菌计数。2.1.2取经25℃培养18～24h的白色念珠菌液体培养物1mL，加入9mL0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释并制成每1mL中含菌数50～100cfu的菌悬液，做活菌计数。2.1.3接种黑曲霉的新鲜培养

6、物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5～7d，加入3～5mL0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL含孢子数50～100cfu的孢子悬液，做活菌计数。2.2供试液的制备［2］取本品10mL，加pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至100mL，混匀，作为1∶10的供试液。2.3验证方法2.3.1细菌、真菌和酵母菌计数法回收率的测定薄膜过滤法联用0.1%吐温80pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲溶液作冲洗剂对各试验菌的回收率进行实验，3次独立平行试验结果的均值见表1［3］。①试验组：取供试液10mL到薄膜过滤器中,用无菌的0.1

7、%吐温80pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲溶液冲洗3次，每次100mL,并在最后1次冲洗液中加入1mL的试验菌液（50～100cfu/mL）冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于预先制备好的营养琼脂培养基或虎红培养基平板上，置30～35℃培养48h或23～28℃培养72h。记录菌落数。试验组的菌回收率=(试验组平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数)÷菌液组的平均菌落数×100%。②菌液组［4］：在过滤器中预先加入大约20mL的无菌0.9%氯化钠溶液，再吸取1mL的试验菌液（50～100cfu