肺鳞癌与人乳头瘤病毒及p53表达的关系论文

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1、肺鳞癌与人乳头瘤病毒及p53表达的关系论文.freela，squamouscell;lungneoplasms;hu-manpapillomavirus;p53geneAbstract:AIMToinvestigatetherelationshipbetanpapillomavirus（HPV）infectionandtheaccumulationofp53insquamouscellcarcinoma（SQCC）oflungs.METHODS84ofSQCCand18ofbronchialchronicinflam-mationsamplesanpapi

2、llomavirususingdigoxingeminlabelledDNAprobe.HPV-E6，E7proteinandtheaccumulationofp53munohistochemistry.RESULTSThepositivesignalainlylocatedinthenucleiofthecells.49%ofSQCCand6%ofchronicinflammationtissuesedbythedetectionofE6andE7proteinmunohistochemistry.30ofthe84squamouscellcarcino

3、masulationofp53inSQCC，buttherelationshipbetu-lationofp53anpapillomavirus，HPV）是一类DNA肿瘤病毒，迄今已发现70多个基因型，高危型HPV与宫颈癌等恶性肿瘤密切相关，近年类，越来越多证据表明HPV感染在部分肺癌尤其是肺鳞癌的发生发展中起重要作用，其确切详尽机制尚不十分清楚.p53是重要的细胞周期调控物质，p53基因突变在人类肺癌中较为广泛，且出现的频率也较高，我们旨在探讨肺鳞癌中HPV感染与p53的关系及其可能作用机制.1材料和方法1.1材料1.1.1标本84（男52，女32）例肺

4、鳞癌和18（男13，女5）例支气管粘膜慢性炎标本均由西京医院病理科提供，平均年龄62.5（32～76）岁.为我院1993/1996年支气管镜检及手术切除标本，经常规福尔马林固定，石蜡包埋.HE染色切片均由两位以上资深病理医师确诊.1.1.2试剂地高辛诊断和检测试剂盒购自德国BehringerMannheim公司，HPV6B，11质粒由美国FoxChase癌症研究中心惠赠，HPV16，18型全基因质粒由德国海德堡癌症研究中心DeVillersE.M教授惠赠.PCR引物由中国科学院上海生物工程研究所合成，常规PCR及HPVDNA产物提取纯化鉴定在本校分子生物学

5、研究所完成，原位杂交探针标记严格按说明书程序进行，采用随机引物法.p53mAb购自Sigma公司.HPV-E6，E7mAb购自SantaCruz公司.SABC免疫组化试剂盒购自武汉博士德公司.1.2方法1.2.1原位杂交5μm切片于预涂APES胶玻片60℃烘烤过夜，常规脱蜡，0.2molL-1盐酸浸泡，5mgL-1蛋白酶K消化，梯度乙醇脱水，室温干燥组织片，预杂交后将杂交液滴加于玻片，96～98℃变性10min，骤冷后42℃恒温杂交过夜，2×SSC，1×SSC，0.5×SSC，BufferI等多次洗涤后封闭30s，加地高辛抗体复合物室温2h，用NBT-BC

6、IP暗处显色1～72h，常规脱水透明封片观察.阳性对照为已知HPV阳性之宫颈癌切片，阴性对照①为杂交液不加探针，阴性对照②为已知不含HPV之肝组织切片.1.2.2免疫组化5μm切片于APES防脱片胶玻片60℃烘烤，常规脱蜡至水，双氧水灭活内源性酶，微波修复抗原，抗原修复液再修复，羊血清封闭，加一抗4℃过夜，洗涤后加生物素化二抗，洗涤后加SABC，洗涤，DAB显色，苏木精轻度复染.阳性对照切片由武汉博士德公司提供，阴性对照①为用正常血清代替一抗，阴性对照②为用PBS代替二抗.结果判定及分析:光镜下观察组织细胞形态，以及原位杂交免疫组化阳性信号.各组间差异显著

7、性检验采用卡方检验.原位杂交和免疫组化两种方法间比较用McNeMar配对卡方检验.2结果2.1形态学观察结果HPV原位杂交阳性信号呈紫蓝色颗粒，位于肿瘤细胞核内，癌旁支气管粘膜柱状上皮内未见阳性信号，某些阳性信号位于凹空样肿瘤细胞内，部分凹空细胞核核膜边缘不齐，围绕核周呈放射状细丝样.HPVE6，E7，p53免疫组化阳性表达为棕黄色颗粒，p53表达位于细胞核内，HPVE6，E7阳性颗粒在胞核、胞质中均有.2.2原位杂交和免疫组化结果HPV原位杂交检测表明肺鳞癌组HPV检出率显著高于粘膜慢性炎症组（P0.01，Tab1），以（E6+E7）阳性代表E6或E7阳

8、性，（E6+E7）阴性代表E6，E7均阴性，经Mc-Nemar配对