脑康灵口服液对偏头痛大鼠神经细胞凋亡的影响论文

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1、脑康灵口服液对偏头痛大鼠神经细胞凋亡的影响论文.freeligrainemodelrat.MethodsTochoosediseasemodelofmigraneeansoffloetryandtransmissionelectronmicroscope.ResultsNaokanglingoralliquidcanadjusttheabnormalultramicro-structureofnervecellofmigrainemodelrats，decreasetheincidenceandtheapoptosispercentage.ConclusionNaokangl

2、ingoralliquidcanblockthenervecellapoptpsisofmigrainemodelrat.【Keyigraine；apoptosis；rat脑康灵口服液是由天麻、当归、川芎、丹参、地龙、钩藤等组成，临床用于治疗颅脑外伤引起的头痛、头晕、恶心、呕吐等。目前.freelg(由上海信谊药业有限公司生产，生产批号：000401)。硝酸甘油注射液（nitroglycerininjection，NTG）每1ml含硝酸甘油5mg(由广州明兴制药厂生产，生产批号：000505)。实验时用注射用水配制成所需浓度。1.2试剂碘化丙啶(PI)，Sigma公司；RNA

3、seA，QIAGEM公司；TritoX-100，E.MERCK公司；其余试剂均为市售分析纯。1.3仪器LKBⅢ型超薄切片机(瑞典)；日立H-600型透射电镜(日本)；COULTERESP型流式细胞仪(美国)。1.4动物SD大鼠，体重250～280g，由西安医科大学实验动物中心提供(医动字第8-005号)。2方法2.1样品制备取健康SD大鼠48只，雌雄各半。随机分为6组，即正常组、模型组、CFG组、NKL3个剂量组，每组8只。参照Cristina、Tassorelli等［1，2］报道的方法，复制硝酸甘油型SD大鼠偏头痛动物模型。除正常组外，其余各组动物sc硝酸甘油注射液10mg

4、/kg。造模30min后按每组ig给药。正常组不作处理，模型组ig注射用水10ml/kg，CFG组igCFG药液10ml/kg，NKL3个剂量组分别ig相应浓度的NKL药液10ml/kg。造模4h每只大鼠ip40mg/kg戊巴比妥钠进行麻醉。尽量放血，断头，剪开颅骨，取出脑组织，除去脑膜和血管。每只大鼠均取同一部位的脑组织块（大脑皮层部位），备用。2.2凋亡细胞形态学观察［3］取健康SD大鼠36只，雌雄各半，随机分为6组，每组6只。样品制备方法同2.1。将取材的新鲜脑组织块，加入3%戊二醛中，固定30min，用0.1mmol/LPBS漂洗，1%锇酸溶液固定30min，梯度丙酮

5、脱水，环氧树脂Epon812渗透包埋，70℃过夜聚合；LKBⅢ型超薄切片机切片，切片厚度为60nm；醋酸双氧铀—枸橼酸铅双重染色；日立H-600型透射电镜观察摄影。观察区域有暗细胞（系凋亡前细胞）、凋亡细胞和凋亡小体者，均属于大脑皮层神经元发生凋亡。记录神经细胞发生凋亡的动物例数，并对各实验组动物神经细胞凋亡发生率进行统计分析。质反应资料采用χ2检验分析，其中，χ26.635时，P0.01；χ23.841时，P0.05；χ23.841时，P＞0.05。实验结果由正常组与模型组比较、给药组与模型组比较中得出。2.3凋亡细胞计数［4］取健康SD大鼠48只，雌雄各半，随机分为6组，

6、每组8只。样品制备方法同2.1项。将取材的新鲜脑组织块用PBS液漂洗，用剪刀剪碎成1mm3大小的碎块，加入适量0.5%TritonX-100裂解组织后，收集细胞悬液，1000r/min离心10min弃上清液。细胞用0.1mmol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）洗2次并悬浮之，加入终浓度为50mg/L的RNAseA，37℃恒浴1h，再加入PI染液至终浓度50mg/L。摇匀后4℃避光静置1h，经尼龙网过滤，调整细胞浓度为1×106个/ml。在COULTERESP型流式细胞仪上计数10000个细胞，氩离子激发光波长为488nm，测定各期细胞DNA含量、凋亡峰，并计算凋亡细胞百分率。2

7、.4统计学处理计量资料实验数据采用SPSS9.0统计软件对实验数据进行处理。实验结果由模型组和正常组进行比较，各给药组与模型组进行比较中得出。3结果3.1动物行为变化除正常组外，其余各组动物给予硝酸甘油30min左右，均出现双耳发红、前肢频繁搔头、烦躁不安等现象。模型组SD大鼠该现象持续约3h，继而出现蜷卧、活动减少等状态；给予NKL药液后，该现象逐渐消失，趋于正常。提示，硝酸甘油型偏头痛SD大鼠有头部不适表现，而NKL对其有逆转作用。3.2NKL对硝酸甘油型偏头痛SD大鼠神经细胞形态的影响日立H-60