正常人外周血淋巴细胞凋亡受体的表达与细胞凋亡的关系论文

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1、正常人外周血淋巴细胞凋亡受体的表达与细胞凋亡的关系论文胡静,何小军,冯永东,杨长永，韩中博,龚建平【摘要】本研究检测凋亡受体Fas、TNFRⅠ、TNFRⅡ在人外周血淋巴细胞(PBL)增殖过程中的表达情况及其细胞周期特异性，并探讨其与凋亡受体途径介导的细胞周期特异性细胞凋亡的关联性。应用双参数流式细胞术检测人外周血淋巴细胞在G0期和经植物凝集素刺激(PHA)进入细胞周期后Fas、TNFRⅠ、TNFRⅡ的表达情况以及细胞周期特异性，同时检测肿瘤坏死因子α、抗Fas抗体诱导人外周血淋巴细胞的凋亡。结果表明：经植物凝集素刺激24小时后的外周血淋巴

2、细胞Fas、TNFRⅠ、TNFRⅡ表达率较G0期外周血淋巴细胞分别增加了（35.55±6.63）%，（30.63±2.66）%，（26.62±5.14）%，均具有显著性差异(P0.01)，而且主要表达在G1期；未经植物凝集素刺激的外周血淋巴细胞停留在G0期.freelalHumanPeripheralBloodLymphocytestoCellApoptosisAbstractTheaimofthisstudyanperipheralbloodlymphocytes(PBL)，andtostudythepotentialroleofFas,

3、TNFRⅠandTNFRⅡincellcyclespecificapoptosis.Theimproveddoubleparameterfloetryatoagglutinin(PHA)respectively.ApoptosisinducedbyIgMtypeantiFasandTNFαethod.TheresultsshoulatedPBLenteringcellcycleincreased（35.55±6.63）%，（30.63±2.66）%，（26.62±5.14）%respectively(P0.01),andmainlya

4、ppearedatG1phase;noapoptosisulationainlyinitiatedatG1Phase.Itisconcludedthatthereisevidentdoseeffectrelationshipbetediatedapoptosis.Moreover,thecellcyclespecificityofreceptormediatedapoptosisiscorrelatedanperipheralbloodlymphocytes;cellproliferationJExpHematol2007;15(3

5、):533-536细胞周期是指连续分裂的细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的整个过程，是细胞的增殖的基础。细胞凋亡是机体维持正常细胞群体数量稳态的重要手段，它是基因调控的细胞程序性的死亡，是正常机体去除不需要的细胞的严格调控的生理过程［1］。细胞凋亡的途径主要包括线粒体途径和凋亡受体途径。凋亡受体途径介导的细胞凋亡是细胞凋亡的重要途径之一，当凋亡因子（如FasL、TNFα）与凋亡受体（如Fas、TNFRⅠ、TNFRⅡ）结合后通过级联反应激活一系列的caspase，最终导致细胞凋亡［2］。本研究以人正常人外周血淋巴细胞（per

6、ipheralbloodlymphocytes，PBL）细胞为研究对象，探讨凋亡受体在G0期PBL中和进入细胞周期后的PBL中的表达情况及其与凋亡受体途径介导PBL细胞凋亡之间的关联性。中国实验血液学杂志JExpHematol2007;15(3)人外周血淋巴细胞凋亡受体的表达与细胞凋亡的关系材料和方法细胞及主要试剂外周血淋巴细胞(peripheralbloodlymphocyte,.freelatoagglutinin,PHA)购自晶美公司，肿瘤坏死因子(TNFα)为英国EC公司产品，抗Fas抗体(CloneDX2)、FITCFas、T

7、NFRⅠ抗体、TNFRⅡ抗体是BectonDickinson公司产品，淋巴细胞分离液为中国医学科学科院血液研究所产品。细胞处理取正常人外周血液10ml，加等体积生理盐水，缓慢加于淋巴细胞分离液上，300×g离心20分钟后，取白膜层，加少量生理盐水，200×g离心10分钟，将清洗干净的淋巴细胞分别置于2瓶含有10ml/L的胎牛血清、抗生素（青霉素10×104U/L和链霉素100mg/L）和RPMI1640培养液中悬浮培养，1瓶加有丝分裂原植物凝集素（PHA），培养液中淋巴细胞应用终浓度为10μg/ml，刺激其生长分裂，另1瓶不加PHA，悬浮培

8、养24小时。PHA刺激的外周血淋巴细胞(3×105/ml)分别加入TNFα(50ng/ml)、antiFas(12.5μg/ml)培养24小时后收获细胞；对照组(未加PHA的