细菌代谢产物中小分子有机酸的高效毛细管电泳分析论文

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1、细菌代谢产物中小分子有机酸的高效毛细管电泳分析论文胡耀华,钟文彬,周林,黄树林【摘要】目的建立高效毛细管电泳法测定甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸的分析方法，测定细菌代谢产物中的小分子有机酸。方法采用毛细管：Beckmancoulter未涂层50μm×60cm(有效长度50cm);缓冲溶液：pH10.5的10mmol/L(含0.5mmol/LCTAB)的硼砂溶液;检测波长214nm，分离电压-20kV，进样压力为1.0psi，进样时间为10s。结果4min内甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸得到基线分离。线性范围分别为：甲酸3.8～

2、30.7mg/L(r=0.9971);乙酸3.3～52.5mg/L(r=0.9961);丙酸3.1～49.5mg/L(r=0.9993);丁酸3～48mg/L(r=0.9925);乳酸7.5～60.5mg/L(r=0.9995)。平均回收率分别为:甲酸99.29%(RSD=0.67%);乙酸98.90%(RSD=1.36%);丙酸99.65%(RSD=0.65%);丁酸99.35%(RSD=0.42%);乳酸98.06%(RSD=1.44%)。结论该方法简单、快速、准确，可用于细菌发酵液中代谢产物有机酸的检测。【关键词】细

3、菌代谢产物小分子有机酸高效毛细管电泳Abstract:ObjectiveToestablishamethodfordeterminingformicacid,aceticacid,propionicacid,butyricacidandlacticacidinbacterialmetabolitesbythehighperformancecapillaryelectrophoresis.MethodsSamplesanCoulter(50μm×50cm)uncoatedfusedsilicacapillaryusing

4、10mmol/Lboratebuffer(pH10.5,containing0.5mmol/LCTAB).TheUVdetection,theseparationvoltage-20kVandinjectionpressure1.0psi×10s.ResultsStandardsamplesofformicacid,aceticacid,propionicacid,butyricacidandlacticacidinutes,andtheirlinearrangesg/L(r=0.9971),.freelg/L(r=0.9

5、961),3.1-49.5mg/L(r=0.9993),3.0-48.0mg/L(r=0.9925),7.5-60.5mg/L(r=0.9995),respectively,theiraveragerecoveriesicacid,aceticacid,propionicacid,butyricacidandlacticacidethodissimple,rapidandaccuratefordetectingtheorganicacidsinbacterialmetabolitesinfermentationliquor

6、.Keyetabolicproduct;organicacid;highperformancecapillaryelectrophoresis代谢流量是细胞生理学的一个基本决定因素，也是代谢途径中最重要的参数。对细菌进行代谢流量分析，特别是代谢产物中小分子有机酸的分析.freelanCoulterP/ACEMDQ毛细管电泳系统(32KaratTMSoftanCoulter未涂层50μm×60cm(有效长度50cm)。甲酸、乙酸(Sigma公司，色谱纯)，丙酸、丁酸、乳酸(Sigma公司，分析纯)，四硼酸钠、十六烷基三甲基

7、溴化铵(CTAB)(广州市化学试剂厂，分析纯)。所有溶液均用超纯水配制和稀释，标准样品和缓冲液经0.22μm滤膜过滤后进样。1.2方法1.2.1毛细管电泳环境的平衡每次进样前毛细管先用水洗3min，再用0.1mol/L的NaOH溶液冲洗3min，水洗3min，然后再用缓冲液冲洗5min。每次更换试样时均用缓冲液清洗5～10min，所需时间以基线平稳为准。1.2.2检测波长的选择以190～250nm为检测波长，检测各种有机酸和运行缓冲液的紫外吸收特性，选择各有机酸吸光度相对较大、而缓冲液吸光度相对较小的波长为检测波长。1.2

8、.3缓冲液浓度的选择采用214nm检测波长，分离电压-20kV，进样压力为1.0psi，进样时间为10s，在pH值为10.5的情况下，评价10～25mmol/L的硼砂缓冲体系。1.2.4缓冲液pH的选择分别以pH9.0、pH9.5、pH10.0、pH10.5、pH11.0的缓冲溶液进行分离，各有机酸分别