蒙药冷蒿的遗传多样性随机引物多态性分析论文

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1、蒙药冷蒿的遗传多样性随机引物多态性分析论文刘越潘宁，黄怡鹤，温婧，周廉【摘要】目的研究内蒙古通辽地区蒙药冷蒿的遗传特异性及通辽、呼和浩特、锡林郭勒3个不同地区蒙药冷蒿的遗传多样性。方法采用随机引物多态性(RAPD)方法，从17组RAPD引物中筛选出13组条带清晰、多态性明显并且重复性好的引物用于实验，并利用Popgen32和NTSYS软件进行数据计算与聚类分析。结果①13组引物共产生的209条带中，有201条多态性带，多态位点百分率达96.17%。②3个地区蒙药冷蒿Ht=0.2381.freelisiafrigidainTong

2、liaopopulationandthreedifferentregionsofInnerMongolia(Tongliao,Hohhot,Xilingol).Methods13groupsofprimersorphicandreproduciblebandsthe17groupsofprimersbyrandomamplifiedpolymorphicDNA(RAPD)method.Thebandsproducedbythe13groupsofprimersersgenerated209bands,including201po

3、lymorphicbands.Thepercentageofpolymorphiclociationisiafrigidapopulationongpopulations(Dst)ongpopulations(Gst)thegeicvariationongpopulations.Keyisiafrigidpopulation;ImprovedCTAB;RAPD;Geicdiversity蒙药冷蒿Atremisiafrigida(蒙语：阿给)，又名小白蒿、菟毛蒿，菊科蒿属的小灌木，是蒙医的常用药，主要分布在内蒙古1～3。近年来，随

4、着中药材标准化进一步深入，为提高中药质量和临床效果，中药材的道地性的研究越来越受到重视4～6。但对民族药的道地性研究甚少。长期以来，蒙药冷蒿一直在民间用于出血疾病的治疗7。研究发现，不同产地来源的蒙药冷蒿制炭后止血效果差异显著，而且来自荒漠草原的蒙药冷蒿制炭后活性成分的含量偏高。目前，冷蒿药材来源为野生冷蒿，随着荒漠化的进程，以及药材的大量开采，将使冷蒿变成濒危物种。为了避免野生药用植物的枯竭，势必要进行药材的规范化栽培种植(GAP)，对冷蒿遗传背景的分析，不但可以从遗传学角度观察引起冷蒿质量变异的原因，也可以为冷蒿栽培种植提供

5、理论指导。在PCR基础上建立起来的随机扩增多态性(randomamplifiedpolymorphicDNA，RAPD)分子标记技术，以其技术简单易行，分析速度快，成本低，不用进行DNA克隆、southern杂交等复杂程序的优点，特别适合于遗传背景不清楚的材料的研究，在中药材鉴定与遗传多样性研究中应用广泛8～10。本实验采用RAPD方法，考察冷蒿的遗传结构，探讨冷蒿止血活性成分变异的遗传学基础。1材料2007-11分别在呼和浩特、锡林郭勒盟当地收集冷蒿干药材;2008-09在内蒙古通辽市奈曼旗采集冷蒿植株，并用冰块冷冻保存。3个

6、冷蒿群体编号见表1，群体间空间距离大于500km。2方法2.1基因组DNA的提取与测定基因组DNA采用改进的CTAB法11提取。DNA大小及其完整性采用标准浓度的λDNA/HindⅢ检测，采用SAM3000微量紫外/可见分光光度计测定A260、A280及A230，据此推知各样本总DNA的含量。2.2RAPD引物的筛选参照王静12以及本实验室11的方法，优化PCR反应体系，对单一DNA样品多引物进行RAPD-PCR扩增。在Bio-RADGelDoc2000凝胶成像系统上观察拍照。最后，筛选出可产生多态性且重复性好的引物组合。表1材

7、料来源Tongliao)E122.16500350～450沙地31株H呼和浩特N40.82(Hohhot)E111.81580335～534.6荒漠草原药材L锡林郭勒N43.95(Xilingol)E115.46790295典型草原药材2.3数据处理与统计分析构建二元数据矩阵，RAPD为显性标记，同一引物的扩增产物在电泳中迁移率相同的条带被认为是同源性的，属于同一位点的条带按清晰可见的强带或反复出现的弱带记为1，无带记为0，形成二元数据矩阵。根据“0-1”原始矩阵，用Popgen32软件计算多态位点比率(P)、Nei's遗传多样

8、性指数(h*)、Shannon信息指数(I*)、总群体的基因多样性(Ht)、群体内基因多样性(Hs)、群体间基因多样性(Dst)、基因分化系数(Gst)、遗传距离(D)和遗传一致度(I)。利用NTSYS软件进行各品种间UPGMA(unethodeticmean)