贲门腺癌经典多药耐药机制探究

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1、贲门腺癌经典多药耐药机制探究【摘要】目的研究贲门腺癌经典多药耐药机制。方法用流式细胞术检测55例贲门腺癌患者癌组织和距离肿瘤5cm以上癌旁正常组织P糖蛋白。结果55例贲门腺癌组织P糖蛋白阳性表达率为50．9%,癌旁正常组织未见P170表达，两者差别有统计学意义。结论贲门腺癌存在经典多药耐药机制,检测癌组织P糖蛋白对化疗药物选择及逆转多药耐药具有重要意义。�【关键词】贲门肿瘤；P糖蛋白；流动血细胞计数Studyontypicalmultidrugresistancemechanismofcardiac

2、adenocarcinomaPENGXue-hong,CHENNuan,XUJian-heng，etal.DepartmentofChestSurgery,TheFirstAffiliatedHospitalofMedicalCollegeofShantouUniversity,ShantouGuangdongProvince515041,China�【Abstract】ObjectiveTostudythetypicalmultidrugresistancemechanismofcardiacad

3、enocarcinoma.MethodsTheexpressionofP170proteinin55casesofcardiacadenocarcinomawasdetectedbyflowcytometry.ResultsThepositive9expressionrateofP170proteinwas50．9%in55casesofcardiaccancertissue.NormaltissuenearcancerhasnopositiveexpressionofP170protein.The

4、rewasanobviousdifferencebetweennormalandcancertissue.ConclusionTherewastypicalmultidrugresistancemechanismincardiacadenocarcinoma,detectionofP170proteinexpressionincancertissuehadsignificanceinselectionofchemotherapeuticdrugsandMDRreversion.�【Keywords】

5、Cardiacneoplasms；P-glycoprotein；Flowcytometry在肿瘤的治疗方法中，化疗占据着不可替代的地位。自从化疗药物应用于临床以来，虽对少数恶性肿瘤的治疗取得了成功，但在大多数恶性肿瘤中收效却不大，这其中一个很重要的原因就是肿瘤细胞对化疗药物产生了耐药性。本文应用流式细胞术检测贲门腺癌P糖蛋白(p-glycoprotein，P-gp)，研究由P糖蛋白介导的经典多药耐药机制。�1资料与方法�1．1一般资料近2年住院手术的贲门腺癌患者55例，男47例，女8例。年龄47~7

6、6岁。入选标准：术前经胃镜病理活检确诊为贲门腺癌，术前未接受化疗，肿瘤病灶起源于贲门，性别、年龄不限。术中取贲门癌组织及距离肿瘤59cm以上癌旁正常组织各1块，采用流式细胞术，检测P糖蛋白。�1．2试剂鼠抗人MDR产物，(P-gp)单克隆抗体(Immunotech公司，法国)，FITC标记兔抗鼠Ig(Dako公司，丹麦)。�1．3流式细胞仪检测方法�1．3．1实体瘤组织单细胞悬液制备术中取新鲜贲门癌及距离肿瘤5cm以上正常癌旁组织0．2~1．0g，以生理盐水洗去血迹，至于重叠的100目铜网和260目

7、尼龙网上，以眼科剪剪成1mm�3碎块，在以眼科镊夹持组织在铜网上轻挫，边挫边以磷酸盐缓冲液(PBS)将挫下的细胞洗入网下的平皿内，直至组织挫完。将收集的细胞悬液以260尼龙网过滤1次去除组织碎块，收入10ml试管内离心(1500r/min，10min)，弃去上清再以PBS漂洗，同前述方法离心2次，均弃上清，备用。�1．3．2免疫标记标记前用PBS漂洗离心1次(1500r/min，10min)以去除固定剂，再将每份悬液分2管，其一加20μlP170工作液(一抗)，其二加20μl羊抗鼠IgG(一抗)工作

8、液，室温下20min，离心(2000r/min，5min)，除上清后加1mlPBS漂洗离心2次，再向上两管中各加20μl羊抗鼠IgG-FITC、室温避光30min，离心后去除上清以除去未结合的荧光抗体，以PBS漂洗离心2次，均弃上清，最后加500μl9PBS待检。取少许细胞液涂片，在荧光镜下可见P-gp阳性细胞光点位于细胞膜上。�1．3．3流式细胞仪检测上机前以标准荧光微球调整仪器使变异系数在2．0%以内，上机后收集2万个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测