非小细胞肺癌中survivin、bcl2和bax蛋白与多药耐药基因的表达及其相关性论文

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1、非小细胞肺癌中survivin、bcl2和bax蛋白与多药耐药基因的表达及其相关性论文【摘要】目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)中凋亡蛋白survivin、bcl2、bax与多药耐药有关基因MDR1mRNA和MRPmRNA的表达,探讨其相互关系及意义。方法选取113例NSCLC病例,采用原位分子杂交检测MDR1和MRP基因mRNA的表达,SP免疫组化法检测survivin、bcl2、bax蛋白的表达。结果113例NSCLC中,MDR1mRNA、MRPmRNA及survivin、bcl2、bax蛋白的检出率分别为51.3

2、%、80.5%、79.6%、59.3%、54.9%。survivin和bax的表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05),bcl2的表达与肿瘤组织学类型有关(P<0.01)。MDR1mRNA与MRPmRNA(P<0.01)、survivin与MDR1mRNA(P<0.05)、bcl2与MRPmRNA(P<0.05)表达之间存在明显相关性。结论凋亡抑制蛋白survivin的高表达和bcl2的过表达可能是导致NSCLC原发耐药的重要因素,检测survivin和bcl2对临床逆转NSCLC多药耐药性具有指导意义。【关键词】肺肿瘤

3、多药耐药细胞凋亡原位杂交免疫组织化学0引言多药耐药性(multidrugresistance,MDR)是影响非小细胞肺癌(nonsmallcelllungcancer.freelRNA的表达,SP免疫组化法检测3种凋亡相关蛋白(survivin、bcl2和bax)的表达,旨在观察NSCLC中多药耐药与细胞凋亡的关系并进一步探讨多药耐药产生的其他机制。1资料与方法1.1资料收集武汉大学中南医院病理科1996~2000年间手术切除并经病理确诊的NSCLC共113例,所有病例术前均未经放化疗。其中男性91例,女性22例。年龄34

4、~77岁,均龄56岁。鳞癌39例,腺癌61例(含细支气管肺泡癌16例),腺鳞癌13例。高分化43例,中分化47例,低分化23例。根据1997年肺癌国际分期修正系统公布的TNM分期标准,Ⅰ期52例,Ⅱ期26例,Ⅲ期11例,Ⅳ期1例,23例无记录。有淋巴结转移者37例,无淋巴结转移者53例,23例无记录。1.2方法1.2.1HE染色切片用于NSCLC组织学分类及分化程度、转移状态的判断。1.2.2原位杂交所用地高辛标记MDR1、MRP寡核苷酸探针及检测试剂盒购于武汉博士德生物公司,其操作按试剂盒说明书进行,以阳性片作阳性对照,PB

5、S代替杂交液作阴性对照。1.2.3SP免疫组化染色按试剂盒说明操作,所用兔抗人survivin多克隆抗体、鼠抗人bcl2和bax单克隆抗体购于福州迈新生物公司,均为即用型。以已知阳性片作阳性对照。PBS代替一抗作阴性对照。1.3结果判断原位杂交染色中MDR1和MRPmRNA以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性细胞。免疫组化染色中survivin、bcl2和bax以胞浆呈棕黄色为阳性细胞。每例取10个高倍视野(×400),每个视野计数100个细胞,计算阳性细胞所占百分比。阳性细胞数≥5%为阳性表达,<5%为阴性表达。1.4统计学处理采

6、用SPSS12.0统计软件分析数据,结果采用χ2检验。P<0.05为显著性检验水准。2结果2.1NSCLC中MDR1mRNA和MRPmRNA的表达及相互关系113例NSCLC中,MDR1mRNA阳性表达率为51.3%(58/113),MRPmRNA阳性表达率为80.5%(91/113)。二者表达与肿瘤组织学类型、分化程度、TNM分期和有无淋巴结转移等临床病理因素均无明显关系(P>0.05),但二者表达之间具有显著相关性(χ2=13.72,P<0.01),.freelRNA表达之间的关系(略)2.2.3bcl2蛋白在不同组织学

7、类型肿瘤中的表达顺序依次为鳞癌>腺鳞癌>腺癌,差异具有统计学意义(χ2=13.06,P<0.01)。但bcl2与肿瘤分化程度、TNM分期和有无淋巴结转移之间差异均无显著性(P>0.05)。2.2.4survivin、bcl2和bax蛋白三者表达之间未见明显相关(P>0.05)。2.3多药耐药基因与凋亡相关蛋白表达间的关系2.3.1survivin蛋白与MDR1mRNA的表达之间呈显著正相关(χ2=6.15,P<0.05),survivin阳性表达率在MDR1mRNA阳性组中较高,见表2,其表达与MRPmRNA表达间无相关性

8、(P>0.05)。表2113例NSCLC中survivin和MDR1mRNA表达之间的关系(略)2.3.2bcl2与MRPmRNA表达之间存在明显正向关系(χ2=4.64,P<0.05),在bcl2呈阳性表达的病例中,MRPmRNA也多数呈阳性表达,见表3,其表达与MDR

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