细胞间黏附分子1在红霉素抗炎机制中的作用

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1、细胞间黏附分子1在红霉素抗炎机制中的作用：李梅华钟小宁柳广南何志义朱敏周刚【摘要】目的从分子水平上探讨红霉素(EM)的抗炎作用机制。方法体外培养人支气管上皮细胞(16HBE)，将细胞随机分为8组，先加入EM干预，后加入肿瘤坏死因子α(TNFα)刺激。分组如下：①空白对照组;②TNFα(20ng/ml,16h)组;③EM(0.3μg/ml，24h)+TNFα(20ng/ml，16h)组;④EM(3μg/ml，24h)+TNFα(20ng/ml，16h)组;⑤EM(30μg/ml，24h)+TNFα(20ng/ml，16h)组;⑥EM(0.

2、3μg/ml，48h)+TNFα(20ng/ml，16h)组;⑦EM(3μg/ml，48h)+TNFα(20ng/ml，16h)组;⑧EM(30μg/ml，48h)+TNFα(20ng/ml，16h)。然后收集各组细胞分别提取RNA，应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法检测细胞间黏附分子1(ICAM1)mRNA的表达。因ICAM1RTPCR产物分子大小约为700bp，与原设计产物分子大小490bp不相符，进一步作基因克隆测序了解基因之间是否具有同源性。结果ICAM1的RTPCR产物即为目的基因：ICAM1基因。TNFα刺

3、激人支气管上皮细胞(16HBE)后，细胞ICAM1mRNA表达增高。先加入不同浓度及作用时间的EM，后加入TNFα刺激人支气管上皮细胞(16HBE)，各组细胞ICAM1mRNA表达均降低，且提示有浓度与时间依赖性。结论TNFα能激活人支气管上皮细胞使其ICAM1基因表达增高，促进炎症的发生发展。EM能抑制人支气管上皮细胞ICAM1基因表达，可能是EM的抗炎作用机制之一。【关键词】人支气管上皮细胞;细胞间黏附分子1;肿瘤坏死因子α;红霉素　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheantiinflamma

4、torymolecularmechanismoferythromycin(EM)inordertofindaneonarydisease(COPD).MethodsHumanbronchialepithelialcellline16HBEDMEM(highglucose).Thecellslydividedintoeightgroups:blankcontrolgroup,TNFα(20ng/ml,16h),EM(0.3μg/ml，24h)+TNFα(20ng/ml，16h),EM(3μg/ml，24h)+TNFα(20ng/ml，16h),

5、EM(30μg/ml，24h)+TNFα(20ng/ml，16h),EM(0.3μg/ml，48h)+TNFα(20ng/ml，16h),EM(3μg/ml，48h)+TNFα(20ng/ml，16h),andEM(30μg/ml，48h)+TNFα(20ng/ml，16h).ThentotalcellularRNARNAbyRTPCR.ThemolecularsizeofICAM1RTPCRproductionit.ResultsICAM1RTPCRproductionRNA.ICAM1mRNAedependentfasio

6、n.ConclusionsICAM1mRNAcanbeincreasedbythestimulationofTNFα,odifyinflammationpresumablybysuppressingICAM1mRNAinhumanbronchialepithelialcells.　　【Keyanbronchialepithelialcells;ICAM1;TNFα;Erythromycin　长期应用小剂量红霉素(EM)治疗慢性气道感染性疾病〔弥漫性泛细支气管炎、支气管哮喘、支气管扩张、慢性阻塞性肺病等(COPD)〕取得良好的效果已经得到临

7、床资料证实〔1～4〕。研究发现，这种疗效与EM抗菌活性无关，而与EM的抗炎活性密切相关〔5，6〕。EM在体内外对许多致炎细胞因子的产生均有调节作用，但是，EM抗炎作用机制仍不清楚。本实验设计研究EM对ICAM1基因表达的影响，从分子水平上探讨EM的抗炎作用机制，为临床防治老年慢性阻塞性肺病提供新的思路。　　1材料与方法　　1.1材料高糖(DMEM)培养基为Hyclone公司产品，胎牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司产品，肿瘤坏死因子(TNFα)系Sigma公司产品，EM系Amresco公司产品。总RNA提取试剂Trizol购自Invitro

8、gen公司，AMV逆转录酶和dNTPs购自美国Promega公司，TaqDNA聚合酶购自TAKARA公司，DEPC系美国S