豚鼠血迷路屏障通透性的体外模型论文

《豚鼠血迷路屏障通透性的体外模型论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、豚鼠血迷路屏障通透性的体外模型论文.freelin内几乎呈直线;③豚鼠血迷路屏障对125I-牛血清白蛋白的通透性曲线与体外模型相似.结论血迷路屏障的体外模型能大体反映在体时的通透性特征.Keyodelinvitro;bovineserumal-bum;bloodlabyrinthbarrier;guineapigAbstract:AIMTostudythemethodofsettingupmodelinvitroforthepermeabilityofbloodlabyrinthbarrierfromguineapigsan

2、dthemodel’spermeability.METHODS①Cochlearmicrovascularendothelialcells（CMEC）fromguineapigsmunohistochemicaltest，andthemodelinvitroforthepermeabilityofCMECallpooltechnique;②Researchedthemodel’spermeabilityonradioiodinated125Ibovineserumal-bum（RISA）;③Studiedthepermeab

3、ilityonRISAofbloodlabyrinthbarrierfromguineapigsinvivo.RESULTS①Themonolayerconfluentcellsshomuno-histochemicaldetectionoffactorVIII，arkantigenofendothelialcell，over95%cellsicbuffypigsmenting;②Af-terRISAadministration，theBake-timecurveofthemodeltookonanascendingpara

4、bola，inappearedlikeastraightline;③PermeabilitycurveonRISAofthemodelinvitrosimillartothatofbloodlabyrinthbarrierinvi┐vo.CONCLUSIONThemodelinvitroofbloodlabyrinthbarrierrevealsthepermeabilityofinvivo.0引言血迷路屏障的作用在于保持迷路液成分的稳定，从而保证内耳行使正常生理功能，同时其通透性异常也是某些内耳疾病发病机制的重要环节，因此

5、，研究血迷路屏障的通透性的调控机制具有重要的临床意义.但是，截止目前在活体动物上开展的相关研究工作中，尚未能取得有意义的进展［1］.耳蜗血管纹等特定部位的微血管内皮细胞是构成血迷路屏障的基础，本研究在分离培养豚鼠耳蜗微血管内皮细胞的基础上，建立起了该屏障通透性的体外模型，并将这一体外模型对125I标记的牛血清白蛋白的通透性与肺和脑微血管内皮细胞，以及与活体动物的通透性进行了对照研究，为今后进一步探索血迷路屏障的体外调控机制打下了良好的基础.1材料和方法1.1材料①兔抗人八因子相关抗原（Ⅷ-RAg）多克隆抗体试剂盒由北京中山生

6、物技术有限公司生产.②Millicell，底部为多聚醋酸酯滤膜的培养碟，底面积为4.2cm2，微孔直径为0.4μm由Millipore公司生产，使用前滤膜上分别涂以醋酸鼠尾胶原和粘连蛋白（Roche）液.③碘化钠（Na125I）购于中国核动力研究设计院第一研究所.将牛血清白蛋白溶于PBS中，加入氧化剂氯甘脲后注入Na125I震荡、上柱、层析、分离，收集产品配成放射浓度为3.7MBqmL-1的工作液.1.2方法1.2.1豚鼠耳蜗微血管内皮细胞的分离培养及鉴定［2，3］选取200g左右的正常杂色豚鼠10只，麻醉，断头，取出听泡，

7、用750mLL-1乙醇浸泡5min，冲洗浸入D-Hanks液中，解剖显微镜下完整剥离出耳蜗外侧壁软组织，分离出含深色色素的血管纹，并将其切碎成0.5mm大小的微小组织块，均匀平铺于直径35mm的培养皿底.贴壁牢固后，向培养皿中加入含有250mLL-1胎牛血清（hyclone）的DMEM（hyclone）细胞培养液，置50mLL-1CO2，37℃培养箱中进行培养.发现有细胞自组织块边缘长出后，6d时刮除所有组织块.待细胞集落增殖到有足够数量后开始首次传代:D-Hanks液冲洗，2.5gL-1胰蛋白酶-0.1mLL-1EDTA细

8、胞消化液（Sigma）消化，待大部分细胞脱壁后，含胎牛血清的培养液中止消化，将细胞悬液离心，弃去上清液后加血清培养液，接种于25mL的培养瓶中继续培养，细胞接种密度为（2～3）×105cm-2.在细胞传代过程中，细胞消化后只留取贴壁较快的约3/4的培养细胞.细胞接种时，只留取约3/4的贴壁