黄连不同炮制品中3种生物碱含量的高效液相色谱法测定论文

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1、黄连不同炮制品中3种生物碱含量的高效液相色谱法测定论文宋平顺，卫玉玲，赵建邦，丁永辉【摘要】目的建立同时测定黄连不同炮制品中3种生物碱的高效液相色谱分析方法，提高黄连炮制品质量标准。方法采用色谱柱为大连依利特KromasilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)；乙腈-0.1%磷酸(45∶55)（每100ml含十二烷基黄酸钠0.1g）为流动相；检测波长为265nm；流速1.0ml/min；柱温为室温。结果盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱进样量在0.300～2.700μg，0.1016～0.3556μg，0.0331～0

2、.3312μg范围呈良好的线性关系。平均回收率为分别为104.01％.freelasilC18柱(250mm×4.6mm,.freel)；乙腈-0.1%磷酸(45∶55)（每100ml含十二烷基黄酸钠0.1g）为流动相；检测波长为265nm；流速1.0ml/min；柱温为室温；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。2.2对照品溶液的制备精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥12h的盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱对照品适量，加甲醇制成每毫升含300，50.8和16.56μg的溶液，即得。2.3供试品溶液的制备取黄连炮制

3、品粉末(过3号筛)约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入1%盐酸甲醇50ml，称定重量，超声提取50min，放冷，再称定重量，用1%盐酸甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.4线性关系的考察精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液（300μg/ml）1，3，5，7和9μl；盐酸巴马汀对照品溶液（50.8μg/ml）2，4，5，6和7μl；盐酸药根碱对照品溶液（16.56μg/ml）2，3，10，15和20μl，依次注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方

4、程,分别为：盐酸小檗碱：Y=4.5500X-1.9597，r=0.9996盐酸巴马汀：Y=4.0011X-1.4412，r=0.9993盐酸药根碱：Y=3.9622X-1.6422，r=0.9999结果表明盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱进样量在0.300～2.700μg，0.1016～0.3556μg，0.0331～0.3312μg范围呈良好的线性关系。2.5精密度实验取同一批黄连药材粉末,按“2.3”项方法制备，精密吸取10μl，注入高效液相色谱仪，重复进样5次，分别测量盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱的含量，结果R

5、SD分别为0.95％，1.10％，1.74％。2.6重复性实验取同一批黄连药材粉末5份，按“2.3”项方法制备，精密吸取10μl，注入高效液相色谱仪，测定盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱的含量，平均含量分别为6.4160﹪，1.6976％和0.0985％，RSD分别为1.37％，1.76％和2.56％(n=5)。结果表明此法重复性良好。2.7稳定性实验取同一批黄连药材粉末,按“2.3”项方法制备，于配制后0，2，4，6和8h进样，精密吸取10μl,注入高效液相色谱仪，测定盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱含量，样品溶液在8

6、h内基本稳定，RSD分别为1.61％，1.48％和2.04％。2.8加样回收率实验取已知盐酸小檗碱（含量为6.4160％）、盐酸巴马汀（含量为1.6976％）和盐酸药根碱（含量为0.0985％）的黄连药材粉末0.05g，精密称定，精密加入盐酸小檗碱（0.2086mg/ml）、盐酸巴马汀（0.2086mg/ml）和盐酸药根碱（0.2086mg/ml）lml，按供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算回收率。结果分别为104.01％，101.23％和102.41％，RSD分别为1.45％，1.76％和2.01％。2.9样品测

7、定对所收集的20份样品按“2.3”项方法制备，精密吸取对照品与样品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，计算含量。结果见表1。表120批黄连炮制品中3种生物碱的含量测定3讨论3.1提取方法的考察本实验比较了甲醇、1%盐酸甲醇和流动相为溶剂，采用超声处理（功率250in，测定同批样品，结果表明以1%盐酸甲醇为溶剂提取略高于甲醇，与流动相提取相当，选择1%盐酸甲醇超声处理40min为提取条件。3.2耐用性实验不同流动相比较，采用乙腈-0.05mol/L磷酸氢二钠(35∶65)（磷酸调pH=3.0）、乙腈-0.05mol/L磷酸二氢

8、钠(43∶57)（每1000ml含十二烷基黄酸钠1.7g），其分离效果没有本实验采用的流动相好。检测波长选择，应用二级管阵裂检测器进行吸收光谱扫描，3种生物碱均有4个最大吸收峰，其中265nm和348nm处吸收与样品相同，可进行含量测定，经比较265nm和348nm处，对3种生物碱含量没有