感觉神经肽p物质在损伤修复中的作用及分子机制

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1、感觉神经肽P物质在损伤修复中的作用及分子机制【摘要】　　为探讨感觉神经肽P物质（SP）在损伤修复中的作用，围绕感觉神经与修复进程中创面/伤口SP代谢的关系、SP在修复细胞表达生长因子及受体、表皮干细胞迁移、分化等方面的作用开展了研究。研究证实感觉神经释放的SP可上调成纤维细胞表达神经肽，诱导成纤维细胞表达生长因子及受体，调控表皮干细胞迁移、分化的作用，进入肉芽组织内的表皮干细胞可跨胚层向血管内皮细胞和成纤维细胞分化，提示感觉神经肽SP参与介导感觉神经调控损伤修复。【关键词】感觉神经肽损伤修复P物质　　EffectofsensoryneuropeptideSP

2、onolecularmechanism　　Abstract：ToinvestigatetheeffectofsensoryneuropeptidesubstanceP(SP)onolecularmechanism.TheresearchetabolismofsensoryneuropeptideSPintheigrationanddifferentiationofepidermalstemcells.Theresultssensorynervesinskinegroportantroleinmigrationanddifferentiationofepide

3、rmalstemcells,cellsmigratedintogradurationtissue.TheresultssuggestthatSPasamediatorofsensorynerversparticipatesintheregulationofol/LSP的聚乙烯醇海绵放置于胎兔皮肤切口内，然后将胎兔送回子宫内，伤后7天剖腹取出致伤胎兔，见胎兔皮肤切口处有明显瘢痕形成；如胎兔皮肤切口内放置已浸泡生理盐水（SP溶剂）的海绵，愈合皮肤无瘢痕，镜下无明显纤维组织增生以及胶原沉积〔6〕。研究结果提示，胎儿皮肤无瘢痕愈合与SP低水平表达有关。　　2成纤维细

4、胞、表皮干细胞SP表达受外源性SP调控　　采用定量PCR、SA)检测SP刺激后的成纤维细胞NFκB的DNA结合活性。研究发现10-7mol/L浓度SP作用30分钟，NFκB活性可达到峰值；SP特异的受体（NK1受体）阻断剂GR73632可阻断SP的刺激效应。SP对NFκB的活化可分别被抗氧化剂PDTC和钙离子拮抗剂BAPTAAM抑制，提示SP的活化作用可能是通过氧自由基和钙离子介导。采用NFκB硫代寡核苷酸圈套能明显抑制成纤维细胞FGF2表达，但对EGF表达无明显作用〔11，12〕。　　4SP在表皮干细胞迁移、分化中的作用及机制　　4.1SP是调

5、控表皮干细胞增殖、迁移、分化的重要因子采用STZ糖尿病大鼠模型，观察皮肤神经肽含量病理性减少对表皮干细胞增殖的影响，结果发现腹腔注射STZ后1周至4周，糖尿病大鼠皮肤SP含量与表皮基底层表皮干细胞标识物（β1整合素、K19）阳性染色细胞数均呈进行性下降，两者明显相关；STZ糖尿病大鼠创面局部应用SP，创缘及新生上皮β1整合素、K19阳性细胞数较对照组明显增加〔13〕。提示SP是维持表皮干细胞增殖的重要因子。　　以往认为表皮干细胞的迁移、分化主要与细胞外基质成分的改变、细胞之间的接触、EGF、FGF等细胞因子的作用有关，对感觉神经肽的作用了解甚少。本研究利用干

6、细胞核标记滞留的慢周期性，以5溴2尿嘧啶脱氧核苷(BrdU)注射ol/L，250μl)1次，伤后3天和5天分别在创缘和肉芽组织可见BrdU及K19、β1整合素免疫阳性细胞，表明表皮干细胞已迁移进入上述组织；未注射SP的大鼠创缘阳性细胞数明显少于注射SP的大鼠，肉芽组织也未见免疫阳性细胞。如以大剂量辣椒素预先毁损感觉神经后行皮肤切割伤，伤后3天创缘BrdU阳性数仅为未注射SP的大鼠的14.43％〔14〕。进一步研究表明，迁移入肉芽组织的表皮干细胞除可分化为成纤维细胞外，也可跨胚层分化为血管内皮细胞。此外，有文献报告，在损伤角膜局部，应用SP可诱导血液中骨

7、髓间充质干细胞向损伤部位迁移，促进修复〔15〕。　　为了解SP对表皮干细胞分化方向的影响，将10-7mol/L浓度SP加入表皮干细胞培养液中，加入后96小时，流式细胞仪检测示，89.7%的干细胞分化为整合素α6和CD71高表达的短暂扩充细胞，对照组无变化〔16〕。将SP分别加入BrdU标记的大鼠表皮干细胞（来源于表皮基底层）培养液中，注射干细胞混悬液于毛囊发育不良的裸鼠皮下，并在回植部位注射SP。注射干细胞混悬液28天后，加入SP的大鼠皮下毛囊数目明显较未加入SP的裸鼠增多，部份皮下毛囊的毛球、内外毛根鞘部位的细胞胞核中可见BrdU阳性染色，表明标记的表皮干

8、细胞进入毛囊发育。如回植未加SP的BrdU标记表皮干