葛根素β环糊精包合物小鼠血浆中生物利用度研究论文

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1、葛根素β环糊精包合物小鼠血浆中生物利用度研究论文廖昌军曹丽萍高秀蓉钟元高谢佳宋波赖小利蓝艳丽袁前文【摘要】目的：研究葛根素β环糊精包合物与葛根素原料药口服灌胃后小鼠体内的生物利用度。方法：采用HPLC测定小鼠血中葛根素浓度，药时曲线数据用DAS2.1.1版药动学分析软件处理。结果：葛根素在小鼠体内药动学过程符合二室模型，葛根素原料药的AUC、Cmax和Tmax分别为1657.28mg·L-1·min-1、26.34mg·L-1和30min，而葛根素β环糊精包合物的AUC、Cmax和Tmax分别为35

2、04.30mg·L-1·min、77.34mg·L-1和30min，统计结果表明AUC之间有显著性差异。结论：葛根素进行β环糊精包合后可以提高葛根素的口服生物利用度。【关键词】葛根素;β环糊精;生物利用度葛根素(Puerarin)是葛根的主要活性成分之一，具有扩张冠状动脉及脑血管、降低心肌耗氧量、改善微循环的作用,是临床心血管疾病的治疗药物之一1。由于葛根素中具多苯环和多羟基的结构，溶解性较差，难以被胃肠道等生物膜吸收.freelin时断头采血0.5ml，-24℃保存。1.3色谱条件C18柱(4.6×1

3、50nm,5μm);流动相:甲醇-1%乙酸(25:75);流速:1ml·min-1;柱温：25℃;检测波长250nm。1.4血浆样品的处理取血样0.5ml，3600r·min-1×5min离心后取上清液0.2ml，加入甲醇溶液0.8ml，漩涡振荡3min，放置5min，再漩涡振荡2min，10000r·min-1×10min离心，取上清液氮气挥干，残渣用0.3ml甲醇溶解，10000r·min-1×10min离心，取上清液20μl进样测定。1.5统计学处理对主要药动学参数AUC和Cmax进行双单侧t检验和T

4、max进行非参数检验。数据以X±s表示，P0.05有统计学意义。2结果2.1方法专属性按“1.3”项下色谱条件及“1.4”项下样品处理方法，分别取20μl空白血浆、PU对照品加空白血浆和葛根素的血浆样品进样测定，HPLC图谱如图1，由图1可知，血浆中其它成分对葛根素的测定没有干扰。图1葛根素的血浆样品HPLC图谱注：空白血浆样品(A)、空白血浆+葛根素对照品(B)和葛根素血浆样品(C)HPLC色谱图。B、C图中所标注“1”为葛根素的峰。2.2葛根素血浆样品标准曲线制备精密称取干燥至恒重的葛根素对照品，配制成

5、浓度为100μg·ml-1的标准溶液。取0.2ml空白血浆10份,分别加入上述标准溶液和甲醇,得到浓度为80、50、40、30、25、20、10、5、2.5、1.25μg·ml-1的系列标准血样。按1.4项方法处理后，分别取上清液20μl进样，测定葛根素的峰面积，并以葛根素峰面积对葛根素浓度回归，葛根素浓度在5～50μg·ml-1范围内线性良好，标准曲线方程C=22.62A-0.471，R=0.9995。2.3溶液稳定性考察精密称取一定量PU对照品于空白血浆中，配制成浓度为100mg·ml-1溶液，室温放置

6、0，2，4，8，10h后按“2.1.1”项下条件分别进样20μl，结果PU峰面积的RSD为0.92%，表明供试品溶液在10h内较稳定。2.4重复性实验精密量取100μg·ml-1的PU标准溶液6份，每份0.3ml，加入空白血浆0.2ml，按“2.1.3.2”项样品处理方法进行处理后测定，计算峰面积，RSD值为1.02%，表明该方法重复性良好。2.5精密度试验精密吸取PU的对照品溶液高、中、低3种浓度各20μl，按“2.1.1”项下条件方法分别重复进样5次，计算峰面积积分值的RSD，高、中、低3种浓度分别为1

7、.35%，0.81%，0.72%，表明方法精密度良好。2.6回收率测定取100μg·ml-1的PU标准溶液0.3ml，加入到0.2ml小鼠血浆中，按2.1.3.1项方法处理，制备高、中、低3种浓度的样品溶液,进样20μl,测定回收率分别为96.55%，97.85%，95.63%，RSD分别为1.06%，0.95%，1.12%(n=5)。2.7血药浓度小鼠灌胃给药后葛根素原料药和β环糊精包合物2组各时间点平均血药浓度结果和平均药时曲线见表1、图2图2包合物与原料药的药时曲线2.8药动学参数采用DAS2.1

8、.1版药动学分析软件对血药浓度数据进行处理，表明葛根素在体内经时过程符合二室模型(权重为1/C2)，结果见表2。表1包合物与原料药测定结果表2葛根素原料药和包合物在体内的药动学参数3讨论有文献报道可以采用萃取小柱5处理血浆,但是操作复杂且成本较高，本文采用4倍甲醇沉淀蛋白6后N2吹干方法处理血浆7,结果血浆中成分对葛根素的测定不干扰且基线平稳。本实验分别给小鼠按0.2g·kg-1给药，药动学数据经DAS2.1.1