整合素β1亚基表达与人脑胶质瘤侵袭与复发的关系论文

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1、整合素β1亚基表达与人脑胶质瘤侵袭与复发的关系论文章翔，吴景文，郭衍，付洛安，高大宽【关键词】脑胶质瘤【Abstract】AIM:Todetecttheexpressionofintegrinβ1geneinhumangliomasandanalyzeitsclinicalsignificance.METHODS:Theexpressionofintegrinβ1genein53piecesofgliomasmunohistochemicalandhybridizationtechniqueinsitu.Thepatientsasof

2、gradeItoⅣasofgradeⅢandⅣRNAexpressioningliomase.CONCLUSION:Thehigherexpressionofintegrinβ1iscloselyrelatedas.Integrinβ1maybeagoodindicatorinpredicatingtheprognosisofgliomaspatients.【Keya;immunohistochemistry;hybridizationinsitu【摘要】目的：检测脑胶质瘤中整合素β1基因表达，阐明其临床意义.方法：应用免疫组化和原位

3、杂交法，分析53例人脑胶质瘤整合素β1基因表达，对患者随访并比较其预后.结果：整合素β1蛋白阳性率.freelRNA表达同蛋白表达.高表达整合素β1的患者预后较差.结论：整合素β1的高表达与脑胶质瘤分化程度低、侵袭性强密切相关，是预测患者预后的较好标示物.【关键词】整合素β1；脑胶质瘤；免疫组化；原位杂交0引言人脑胶质瘤细胞恶性增殖和侵袭生长是其病理特征之一，也是术后肿瘤复发，导致患者预后不良的主要原因.该过程涉及肿瘤细胞粘附、基质降解、细胞迁移等多环节.肿瘤侵袭与各种因素有关，如：整合素（integrin）、tenascin及透明质

4、酸等［1-3］,其中细胞粘附分子integrin是肿瘤侵袭生长的步骤之一，它通过与细胞外基质蛋白的相互作用，以及细胞间的粘附和信号传导，促进肿瘤形成、生长、分化和转移［3］.Integrinβ1是粘附分子家族的主要成员，它与脑胶质瘤恶性表型以及患者预后的相互关系，国内尚研究报道甚少，对此，我们采用免疫组化和核酸原位杂交法进行了初步探讨.1材料和方法1.1材料①样本来源人脑胶质瘤石蜡标本取自1995/1996本校西京医院病理科手术标本蜡块，共53例.标本均经40gL-1甲醛固定，常规石蜡包埋，连续切片，厚5μm.取材患者年龄21~74岁

5、，平均(47±11)岁.胶质瘤分化程度按annheim公司的地高辛寡核苷酸加尾标记试剂盒操作流程进行.1.2方法1.2.1免疫组化按试剂盒说明书，采用SABC法，对4μm厚系列石蜡切片进行组化染色，检测各级脑胶质瘤标本integrinβ1表达.1.2.2核酸原位杂交mRNA原位杂交方法和步骤按BoehringerMannheim公司的地高辛标记和检测试剂盒操作流程进行.实验中以预杂交液代替杂交液为空白对照；阳性标本重复染色作为阳性对照，杂交前RNase消化并以正义寡核苷酸探针代替反义寡核苷酸探针为阴性对照.杂交主要步骤：切片脱蜡水化，

6、1×PBS/DEPC液洗5min×2次；40gL-1多聚甲醛，1×PBS后固定.依次入pH7.2，1×PBS溶液、0.1molL-1甘氨酸＋1×PBS溶液，4gL-1TritonX100＋1×PBS溶液漂洗.经50mgL-1蛋白酶K在37℃下孵育30min后，入4gL-1多聚甲醛＋1×PBS溶液5min，以1×PBS洗片后，浸入25gL-1乙酸酐10min，2×SSC10min，然后将切片移入杂交液.杂交液内探针浓度为50mgL-1，42℃，振荡杂交16h.切片经梯度SSC和2×PBS漂洗后，加AP标记的抗Dig抗体Fab片段(浓度1

7、∶800)，37℃,40min，室温1h，分别用TSM1液和TSM2液漂洗，滴加NBT/BCIP湿盒中避光显色4～6h，TE缓冲液终止显色，1×PBS洗5min，中性红复染，脱水透明，中性树胶封片.统计学处理：数据以百分率（%）表示，采用χ2检验.2结果2.1Integrinβ1的表达及分布Integrinβ1阳性染色为棕黄色颗粒，分布于胶质瘤细胞膜和细胞质.结果判断为随机选择的5个高倍视野（×400），阳性细胞数≥5个，即为β1染色阳性.阳性程度分级为(-)为无棕黄色颗粒，(+)为阳性细胞数占总数≤10%，()为阳性细胞数占总数11

8、%～50%，()为阳性细胞占总数50%以上（Fig1）.统计分析表明（χ2检验），Ⅲ~Ⅳ级脑胶质瘤阳性率明显高于Ⅰ~Ⅱ级脑胶质瘤(P0.05），Ⅰ,Ⅱ级间和Ⅲ,Ⅳ级间的integrinβ1阳性率比较差异不显著（P0.05