苦参碱对单核细胞源性泡沫细胞形成及pparγ，caveolin1表达的影响论文

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1、苦参碱对单核细胞源性泡沫细胞形成及PPARγ，caveolin1表达的影响论文【摘要】目的:观察苦参碱对oxLDL诱导的单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇脂和PPARγ,小凹蛋白1表达的影响.方法:用荧光分光光度法测定胆固醇浓度;采用TBARS法检测细胞内脂质过氧化产物；用油红O染色法检测泡沫细胞的形成；用荧光RTPCR和A及oxLDL共同孵育后，细胞内形成大量脂滴，胆固醇酯(CE)和细胞内脂质过氧化产物(MDA)含量由(3.4±0.6)mg/L,(0.43±0.07)nmol/L升至(64.8±6.8)mg/L,(8.50±1.23)nmol/L(P0.05)，泡沫细胞由(4.7±2.2

2、)%升至(77.8±7.0)%(P0.05)，而PPARγmRNA和PPARγ,小凹蛋白1蛋白表达由（4.4±0.8）,（0.5±0.09）,（0.6±0.09）降至（1.6±0.4）,（0.33±0.09）,（0.33±0.09）(P0.05)，苦参碱低、中、高干预组细胞内积聚的CE和MDA含量分别为(29.7±4.9)mg/L,(1.92±0.46)nmol/L,(5.8±1.3)mg/L,(0.6±0.08)nmol/L,.freelg/L,(0.43±0.07)nmol/L;泡沫细胞为(46.2±5.8)%,(16.3±3.4)%,(4.8±1.5)%,PPARγmRNA和PP

3、ARγ,小凹蛋白1蛋白表达为（6.4±2.2）,（0.6±0.08）,（0.5±0.09）,（7.4±2.2）,（0.6±0.08）,（0.6±0.07）,（8.6±2.7）,（0.6±0.06）,（0.7±0.06），与oxLDL+PMA组比较有显著性差异(P0.05).结论:苦参碱减少oxLDL诱导的单核细胞源性泡沫细胞的形成及细胞内胆固醇聚集，增加泡沫细胞内PPARγ,小凹蛋白1的表达.【关键词】苦参碱;泡沫细胞;过氧化增殖物激活型受体γ;胆固醇;小凹蛋白10引言动脉粥样硬化一个重要的特征是单核细胞进入损伤的动脉壁进而分化为巨噬细胞.这些巨噬细胞吞噬大量的脂质变为泡沫细胞

4、［1］.在人类和小鼠粥样斑块损伤中可见过氧化物酶增殖物激活受体(PPARγ)明显表达.freela公司；胆酸钠美国Amresco公司.胆固醇购自GourMetCellApplication公司；苦参碱(一种生物碱,具有四环的喹嗪啶类结构，熔点75.5~77.5℃,纯度99%,溶于水),批号为20040625，分子质量248.36，宁夏中药厂提供.1.2方法健康人血浆购自宁夏中心血站，按照常规方法分离、提纯，提取的LDL以含0.1g/LEDTA的TrisHCl缓冲液(pH7.6)4℃透析48h,过滤除菌,考马斯亮蓝G250法定量蛋白.在分组干预时，使苦参碱终浓度达到以下分组的浓度［4］：①

5、对照组：对细胞没有任何干预；②oxLDL+PMA组：培养细胞中加入终浓度为0.5mg/L的PMA,100mg/L的oxLDL;③苦参碱低剂量组：培养细胞中加入终浓度为0.5mg/L的PMA,100mg/L的oxLDL,2.5×10-4mol/L的苦参碱；④苦参碱中剂量组：培养细胞中加入终浓度为0.5mg/L的PMA,100mg/L的oxLDL,5×10-4mol/L的苦参碱；⑤苦参碱高剂量组：培养细胞中加入终浓度为0.5mg/L的PMA,100mg/L的oxLDL,1×10-3mol/L的苦参碱，各组继续培养48h.按文献［5］用荧光分光光度法测定各样品的胆固醇浓度，测定游离胆固醇时

6、，反应液中省去胆固醇酯酶，胆固醇酯的含量用总胆固醇与游离胆固醇的差值获得.按照MDA测定试剂盒说明书的方法，检测MDA的含量及活性.显微镜下观察，细胞内脂质呈红色，细胞核呈蓝色.400倍光镜下非重复计数100个细胞，计出泡沫细胞所占的数量.按Trizol试剂盒说明书提取总RNA，提取的RNA溶于适量DEPC水中，备用.逆转录总反应体系为50μL,总RNA10μg,oligdT2μL,混匀短暂离心,70℃预变性10min,冰浴5min;加入MMLV逆转录酶2μL,RNasin1μL,dNTP2μL,MMLV缓冲液10μL40℃逆转录60min,94℃5min灭活逆转录酶.荧光定量PCR引物序列资

7、源自GenBank序列数据库.根据基因的相对量=2-△△Ct，在该公式中，Ct是热循环仪检测到反应体系中荧光信号的强度值，△△Ct=［CtGI（待测样品）-CtGAPDH（待测样品）］-［CtGI（校正样品）-CtGAPDH（校正样品）］.GI是目的基因，校正样品是任何被选做代表1倍目的基因表达量的样品，使用这一方法可以直接得到目的基因相对于管家基因的定量.按文献方法［6］,待测样品用BCA试剂测