槲皮素铜(ⅱ)配合物清除自由基活性的研究论文

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1、槲皮素铜(Ⅱ)配合物清除自由基活性的研究论文【摘要】目的研究槲皮素铜(Ⅱ)配合物的抗氧化作用。方法采用DPPH法和NBT法分别测定了槲皮素铜(Ⅱ)配合物对二苯代苦味肼基自由基（DPPH·）和超氧阴离子（O2-·）的清除作用。结果槲皮素铜(Ⅱ)配合物能有效清除DPPH·和O2-·，其清除能力均强于单独的槲皮素。结论槲皮素铜(Ⅱ)配合物是一种较强的自由基清除剂，具有较高的SOD活性。【关键词】槲皮素；铜(Ⅱ)配合物；自由基；抗氧化作用Abstract：ObjectiveToinvestigatetheantioxidantp

2、ropertiesofquercetin-Cu(II)plexes.MethodsTheantioxidantpropertiesofquercetinCu(Ⅱ)plexesa产品。槲皮素（Quecetin）购于成都超人植化有限公司（BR）。槲皮素铜配合物按文献［9］提供的方法合成，所有其它试剂均为分析纯。756MC型紫外可见分光光度计，石英比色皿。1.2体外清除DPPH·自由基的作用DPPH用无水乙醇配制成0.65mmol/L的溶液，临用时稀释。DPPH溶液的浓度在0.01mmol/L～0.08mmol/L范围内与其

3、在517nm处的吸光度线性相关，其线性回归方程为：A=0.1337CDPPH-0.0091，r2=0.9981。样品溶液用1∶1（v/v）的DMF-乙醇溶液配制，在1.9ml0.065mM的DPPH溶液中加入0.1ml不同浓度的样品溶液。于室温下反应30min，在517nm下测定吸光度Ai。以相应溶剂代替样品作为空白对照，吸光度为Amax，相应样品溶液的吸光度为A0。每个样品做3次平行样，取其平均值。DPPH自由基的清除活性按下式计算：DPPH·Scavenging(%)=(1-Ai-A0Amax)×100%半数清除浓度

4、（EC50）根据实验结果计算。1.3体外清除超氧阴离子（O2-·）的作用0.1ml样品溶液加到含有0.4mmol/L黄嘌呤、0.24mmol/LNBT的pH=8.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲体系中，然后再加入黄嘌呤氧化酶溶液1ml混合均匀。反应混合物在37℃水浴中反应20min。然后加入2ml69mmol/L的十二烷基苯磺酸钠（SDS）溶液终止反应，在560nm下测其吸光度Ai，以相应溶剂代替样品作为空白对照，吸光度为A0。每个样品做3次平行样，取其平均值。O2-·清除活性按下式计算：O2-Scavenging(%)=

5、Ai-A0Amax×100%半数抑制浓度（IC50）根据实验结果计算。2结果2.1槲皮素铜配合物体外清除DPPH·自由基的作用DPPH·是一种稳定的自由基，其乙醇溶液显紫色，在517nm处有最大吸收。当有自由基清除剂存在时，DPPH·的单电子由于被配对，DPPH·浓度减小而使其颜色变浅，在517nm波长处的吸光度会减小。从图1可以看出，槲皮素铜配合物具有显著的清除DPPH·自由基的能力，随着浓度的增加，清除率也呈明显上升趋势，呈现量效关系。槲皮素铜配合物对DPPH·自由基的清除能力高于单独的槲皮素。根据实验结果，槲皮素

6、铜配合物和槲皮素的EC50分别是3.67，4.82μmol/L。2.2槲皮素铜配合物体外清除超氧阴离子（O2-·）的作用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶是一组典型的释放O2-·的酶反应体系。O2-·可使NBT还原变成甲臜（蓝紫色），其最大吸收峰为560nm。自由基清除剂可以清除O2-·而抑制甲臜的形成,因此通过测定吸光度减少来求得自由基清除剂对O2-·的清除能力。从图2可以看出，槲皮素铜配合物具有显著的清除O2-·的能力，随着浓度的增加，清除率也呈明显上升趋势，呈现量效关系。槲皮素铜配合物对O2-·的清除能力高于单独的槲皮素。根据

7、实验结果，槲皮素铜配合物和槲皮素的IC50分别是2.33，3.46μM。3讨论槲皮素是抗氧化能力较强的一种黄酮类化合物，能有效清除多种活性氧自由基。从槲皮素的结构来看，其B环上的3’，4’-邻位羟基是其能有效清除O2-·的主要原因［10］。槲皮素的3OH～4C=O和3’，4’-OH能和两个铜离子发生配位形成槲皮素铜(II)配合物［11］。槲皮素铜(II)配合物的清除自由基的活性比单独的槲皮素的活性要高。槲皮素铜(II)配合物虽然没有了邻位的羟基，但仍然表现出较高的自由基清除能力，这可能与Cu(II)的配位有关。当配合物溶

8、于水时，水分子有可能在配合物分子平面上下方配位，而形成变形的四方锥或八面体构型。由于水分子配位较弱，水分子易被O2-·取代，同时又由于配体分子呈平面结构［12］，位阻小，有利于O2-·向中心离子靠近，其反应的可能机理如图3所示。因而槲皮素铜(II)配合物有可能和其它金属配合物［13，14］一样具有类似SOD的活性。配