化学发光免疫法测定胰岛素的实验研究论文

《化学发光免疫法测定胰岛素的实验研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、化学发光免疫法测定胰岛素的实验研究论文【摘要】目的探讨测定胰岛素（IRI）的可靠方法。方法采空腹血不抗凝，离心分离成血清，直接上机测定。结果线性范围在0～335.0mIU/L；灵敏度：0mIU/L的IRI，其平均光量子数为3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子数为30350，152.0mIU/L的IRI，其平均光量子数为357399.freelIU/L的IRI，其平均光量子数为684567。特异性：测定质控血清时，测定值在靶值的95%～105%范围内。精密度：N=60CV≤5%。结论化学发光

2、免疫法测定胰岛素（IRI），灵敏度高，特异性好，精密度高，是一种可靠而稳定的检测方法。【关键词】胰岛素（IRI）；光量子数；前胰岛素原；胰岛素原；化学发光免疫法【Abstract】ObjectiveToexploreareliablemethodforthedeterminationofinsulin.MethodsGatherfastingagglutinatingblood,centrifugalizethemrespectivelytogettheserum,enttodetermine.Resu

3、ltsLinearrang:0～335.0mIU/L，senitivity:themeanquantumof0mIU/LIRI,10.1mIU/LIRI,152.0mIU/LIRIand335.0mIU/LIRIined,themeasurevlalueiluminescenceisareliable,stablemeasurementmethodfordeterminationofinsulin;preproinsulin;proinsulin;chemiluminescence胰岛素（IRI）是一种

4、蛋白质激素，这是由胰岛中的β细胞所合成、储存和分泌的。IRI的功能是调节血液中葡萄糖的浓度水平。IRI初期是在β细胞中，以一种大分子量（分子量为1200）前胰岛素原的形式存在。前胰岛素原是一条由110氨基酸组成的单链前体。前胰岛素原被切除掉24个氨基酸序列后形成胰岛素原（分子量为9000），胰岛素原是胰岛素和C-肽的前体［1］。IRI是由两条氨基酸链组成的。最初，IRIA链是由21个氨基酸组成，B链是由30个氨基酸组成；而C-肽是由31个氨基酸组成。IRI是随餐后血液中葡萄糖的浓度高低而产生应答的。IR

5、I水平虽然不是糖尿病患者常规诊断方法，但是IRI水平的检测对于空腹低血糖患者、普通人群中的胰岛素耐受患者、β细胞分泌功能异常患者的意义非常大［2，3］。1材料与方法1.1原理IRI的测定是一种直接化学发光技术和双抗体两点夹心免疫分析法相结合的测定方法。第一种抗体称为标识抗体，是由单克隆抗胰岛素抗体标记吖啶酯形成的；第二种抗体称为固相化抗体，是由单克隆抗胰岛素抗体以共价键的方式与顺磁性颗粒相结合形成的。血清中的胰岛素与相应抗体发生免疫反应后产生光量子，其光量子数的多少与血清中胰岛素的浓度成正比，经标准曲线

6、计算即可求得血清IRI的浓度水平。1.2仪器与试剂仪器：BAERACS-180型全自动化学发光免疫分析仪。试剂（双试剂）及标准液由广州宝迪有限公司提供。1.3方法取血清于样品杯中，置全自动化学发光免疫分析仪上，调整好检测参数：血清25μl+第一试剂50μl于37℃孵育5min，加第二试剂250μl于37℃孵育2.5min，用蒸馏水对反应杯进行分离、抽吸、清洗，最后分别加300μl酸试剂和碱试剂到反应系统中进行反应发光，读取光量子数，再根据标准曲线，计算出结果。1.4标准曲线制备采用两点定标法，将标准血清

7、0.0mIU/L和138.0mIU/L安放于仪器的定标位置上，编入测定程序，上机测定自动打印出标准曲线。2结果2.1精密度取混合血清分成两份，一份当天测定60次，结果IRI的值为22±0.8mIU/L，其对应的CV值为1.8%；另一份做批间试验，测定10次，测定统计值为21±1.2mIU/L，其对应的CV值为2.8%。2.2灵敏度0mIU/L的IRI，其平均光量子数为3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子数为30350，152.0mIU/L的IRI，其平均光量子数为357399，335.0m

8、IU/L的IRI，其平均光量子数为684567。IRI测定的范围为0～335.0mIU/L。2.3回收试验在IRI为25mIU/L的血清中分别加入浓度为1mg/L的胰岛素原、浓度为500μg/L的C-肽、浓度为1mg/L的胃泌素、浓度为1mg/L的胰高血糖素、浓度为1mg/L的胰泌素进行回收试验,分别测得其回收率为:100.8%，95.1%，96.6%，100.2%，101.6%。2.4线性分析对一份定值血清稀释不同浓度，观察测定体系光量子