浅谈电化学发光免疫法测定抗HCV-IgG.pdf

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1、世界最新医学信息文摘2014年第14卷第13期169·医学检验·浅谈电化学发光免疫法测定抗HCV-IgG王文杰(黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江哈尔滨150001)摘要：目的探讨电化学发光免疫法测定抗HCV-IgG的原理及方法。方法采用双抗体夹心法原理进行测定。结论电化学发光免疫法测定抗HCV-IgG安全有效，值得在临床推广使用。关键词：检测检验；免疫；抗体中图分类号：R446文献标识码：BDOI：10．3969／j．issn．1671—3141．2014．13．1271原理每批HCVcombi

2、试剂盒必须用新鲜试剂盒HBsAgCall、采用双抗体夹心法原理。第一步：40l样本、60lCal2校准一次。另外，以下情况需要再次校准：同一批号生物素化HCV抗原及60tA钌复合体标记a的HCV抗原一试剂使用1个月。一盒试剂在仪器上放置时间超过7d。系起孵育，反应形成“三明治”样抗原一抗体复合体。第二步：统误差造成的质控失控。在编辑各项目的参数时，已经在Application—Calib菜单加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。第三步：反应中定义好了

3、校准类型和几点校准。因此在对各项目进行校准时，只需在校准菜单Calibration中进行即可。进入calibra—混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结tion—stats菜单，用鼠标选择需校准的项目，再根据需要点合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通单点校准(BLANK键)或两点校准(TWOPOINT键)、跨距过光电倍增管进行测定。Elecsys自动将标本产生的光电信校准(SPAN键)、多点校准(FULL键)，再选择其他项目进号与从HBsAG定标液得出的Cut—of值相比较

4、。行相应选择，最后点SAVE，将校准物放人在Calibration—2标本采集Calibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始采集无抗凝静脉血23ml，也可使用肝素锂、校准。EDTA—K3或草酸钠抗凝血浆。按标本签收程序签收。不能6操作步骤及时检测的标本可于2～8℃保存。6．1样本检测程序3试剂单个样本输入，在主菜单下选择Workplace～Testslection，3．1试剂来源在SequenceNO．栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个德国罗氏公司原装配套试剂。项目

5、或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。3．2试剂组成批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace—3．2．1MTestsleetion，在Sequence．NO．栏输入起始标本号，然后选择包被链霉素的磁珠微粒(透明瓶盖)，每瓶6．5ml；包被该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入链霉素的磁珠微粒，0．72mg／ml。含防腐剂。该批标本的最后一个标本号，点OK即可。3．2．2R16．2进样分析缓冲液(灰色瓶盖)，每瓶7ml，HEPESb缓冲液，将标本按在Workplace菜

6、单中输入的标本号顺序在样本pH5．0；R2缓冲液(黑色瓶盖)，每瓶7ml，HEPES缓冲液，架上排好，放入进样盘内，按START键，输人该批上机标本pH5．0。的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。3-2_3Rla6．3计算方法冻干的生物素化HCV抗原(白色瓶盖)，每瓶加I．2ml仪器会自动根据Call和Cal2的测定值计算Cut—off值。溶解液溶解；R2a冻于的钌复合物标记HCV抗原(黑色瓶每一个标本的结果以有反应性或无反应性及Cut—off指数形盖)，每瓶加1．2ml溶解液

7、溶解。式(标本信号／Cut—off)报告。3．2．4其他7质量控制Rib及R

8、a的溶解液(白色瓶盖)，每瓶1．4ml水，经过7．1室内质控防腐处理；R2b及R2a的溶解液(黑色瓶盖)每瓶1．4ml水，用质控品1和质控品2，至少每24h或每一次校准后测经过防腐处理。定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测3．3校准品值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应Call：阴性定标液(白盖12瓶，lml／瓶人血清，含防腐剂。采取纠正措施。Cal2：阳性定标液(黑盖1，2瓶，每瓶1．3ml，

9、人抗HCV抗7．2具体操作体阳性血清，经过防腐处理。对于HBsAG和抗一HIV1／2无参考罗氏电化学发光操作程序。反应。8结果解释3．4质控品样本的CO1值<0．9判断为无反应性。样本的COI值ElecsysHCVcombi质控品1和2(precicontro1)。≥1．0判断为有反应性。所有初次检测有反应性的样本必须3．5其他所需辅助试剂重复双份检测。样本的COl值≥0．9且<1．0判断为临界值。Elecsys通用稀释液，Elecsys系统缓冲液fproCel1)，