ALV-J对鸡骨髓源树突状细胞生物学功能影响的研究

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1、分类号S855.3学校代码10564UDC学号2012102805密级博士学位论文ALV‐J对鸡骨髓源树突状细胞生物学功能影响的研究刘迪指导教师姓名廖明教授申请学位级别博士专业名称预防兽医学论文提交日期2015年4月论文答辩日期2015年5月学院名称兽医学院学位授予日期答辩委员会主席吴清平研究员华南农业大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研

2、究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：日期：年月日摘要禽白血病是由反转录病毒科甲型反转录病毒属禽反转录病毒引起的一种禽类多种肿瘤性疾病的统称。此病自发现以后就在世界各国鸡群中广泛流行，主要通过垂直传播并引发肿瘤产生，导致鸡死亡和消瘦、生长发育不良，同时引起机体抵抗力下降和免疫抑制，是危害养禽业的主要疾病之一。由于对禽白血病的研究热点往往都集中在病毒的流行病学，致病性，致瘤和分子结构与功能方面，对于其导致免疫抑制的机制研究的并不十分

3、清楚。本研究通过体外诱导培养免疫细胞分化和发育成熟的技术，研究和分析了ALV-J在树突状细胞分化、发育和成熟的过程中所造成的影响。由于树突状细胞的制作和分化过程研究的比较清楚，与其在抗原递呈和抗肿瘤方面的特殊地位，我们选择了建立体外培养并诱导分化的树突状细胞培养方法，并以此为基础，研究ALV-J对其分化成熟的影响。为了研究病毒是否能顺利感染分化中不同状态的树突状细胞，根据细胞培养和病毒培养所需的时间，在细胞分化培养的第1d、2d、4d、6d分别接种ALV-J。结果发现，在第1d、2d、4d病毒可以

4、成功感染细胞，第六天接毒的样品，病毒感染失败。在实验过程中发现在接毒后的5-6天内，细胞的生长，分化情况并无明显差异。在接毒6天以后，细胞分化并接近成熟的时期，细胞数量开始减少，并且出现了形态变化。后经细胞凋亡实验发现，ALV-J可以导致细胞在分化的后期接近成熟时，细胞开始过早的凋亡。对部分TLR和细胞因子的mRNA表达水平的检测结果也显示，大部分检测的mRNA表达水平都出现了显著性下调。结果表明，ALV-J的感染抑制了树突状细胞的成熟，并且造成了树突状细胞的凋亡，并影响到了细胞的正常生物学功能。

5、为了研究ALV-J对树突状细胞生物学功能影响的机制，进一步分析了树突状细胞的miRNA表达水平。发现了122种差异表达的miRNA。其中已知的miRNA81种，未知新发现的miRNA41种。在已知的81种差异表达的miRNA中，发现了4种与细胞免疫功能，ALV致病性有关的miRNA，分别是gga-mir-221、gga-mir-211、gga-mir-204和gga-mir-6651，这些miRNA共同调控着细胞内源性刺激应答、抗原递呈和加工、细胞凋亡和慢性骨髓白血病相关的细胞功能和通路。经miR

6、NA表达水平的分析，这些细胞功能和代谢通路是呈激活状态的。说明，病毒感染没有直接对细胞的抗原递呈功能产生影响。同时，发现这些miRNA与慢性骨髓白血病有关，可能与ALV-J导致骨髓瘤型白血病有一定的关系。I对显著性差异的细胞功能和代谢通路的分析结果发现多集中于细胞的生理代谢和能量物质代谢方面。ALV-J的感染使得这些功能的调控基因发生紊乱。细胞在分化的过程中，需要多种基因的调控，也需要营养和能量的供给。而ALV-J感染会影响到调控基因的表达，进一步影响细胞正常的生理和新陈代谢功能，从而导致细胞分化

7、失败，活性降低和凋亡等。本研究发现ALV-J会严重影响树突状分化成熟。而这种情况可能设计大部分甚至所有免疫细胞的分化和成熟，进而导致免疫抑制。本研究首次从免疫细胞分化的角度去分析研究ALV-J导致免疫抑制的机制，对于ALV-J导致免疫抑制机制的研究，提供了一个新的研究方向，将有助于进一步全面的研究ALV-J导致免疫抑制的原因和机制。关键词：ALV-J，免疫抑制，树突状细胞，细胞凋亡，miRNAIIThebiologicalfunctioneffectonthechickenbonemarrow-d

8、eriveddendriticcellswithALV-JinfectionLiuDi(CollegeofVeterinaryMedicine,SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642,China)Abstract:AvianLeukosis(AL)isageneraldesignationofavarietyofavianneoplasticdiseasescausedbyAvianLeukosisVirus（ALV）,wh