黑水缬草组织培养与快速繁殖研究

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1、黑水缬草组织培养与快速繁殖研究【摘要】目的对黑水缬草愈伤组织诱导培养基和生长的培养条件进行研究，构建黑水缬草快速繁殖体系。方法通过筛选外植体，添加不同种类及浓度的生长调节剂对黑水缬草进行愈伤组织诱导、芽增殖培养及生根培养。结果诱导愈伤组织适宜培养基：MS+0.5mg/LNAA+5.0mg/L6BA。芽增殖培养以MS+0.2mg/LNAA+10.0mg/L6BA为宜。生根培养以MS+0.1mg/LNAA为佳。结论利用组织培养技术能够实现黑水缬草快速繁殖。【关键词】黑水缬草组织培养快速繁殖　　AbstractOb

2、jectiveToprovidesomeneurensisSmir.exKomthroughstudyingonmediumarycultureofdifferentexplants,cultureofclusterbudsandtheirrootingcultureediumoftreatmentbinationsofaddingdifferenthormones.ResultsTheappropriatemediumfordifferentculturestagesg/LNAA+5.0mg/L6BAinca

3、lluscultureinduction,MS+0.2mg/LNAA+10.0mg/L6BAindifferentiationandsubcultureofclusterbuds,MS+0.1mg/LNAAinrootingculture.ConclusionRapidpropagationcanbeachievedurensisSmir.exKom.　　KeyurensisSmir.exKom;Tissueculture;Rapidpropagation　　黑水缬草（ValerianaamurensisSmi

4、r.exKom）为败酱科（Valerianaceae）缬草属（ValerianaLinn.）多年生草本植物。在我国产于东北，集中分布于长白山及其余脉地区。入药部位为根和根茎。黑水缬草中主要含有环烯醚萜、倍半萜、生物碱和黄酮四大类型化学成分〔1〕，具有镇静、解痉、抗肿瘤活性、抗抑郁活性等作用，尤其是其倍半萜类和缬草酯类化合物具有很大的利用潜力，有望从中寻找出新型的抗抑郁药和镇静药〔2〕。目前缬草提取物及其制剂在国际上十分畅销，销售额列植物药前10名〔3〕。　　我国多利用野生缬草资源，不利于大规模生产。由于近年旅游开

5、发以及自然环境的破坏和无节制的采挖，野生状态的缬草资源已急速下降。又由于缬草属植物为多年生草本，自然生长十分缓慢，野生资源更趋于枯竭。开展黑水缬草的组织培养及快速繁殖的研究，就显得更为迫切和重要。而关于缬草属植物的组织培养研究有少数报道，陈建荣等〔4〕对诱导缬草愈伤组织作了初步研究。经查阅文献，关于黑水缬草的组织培养尚未见相关报道。本研究旨在通过对黑水缬草组织培养的研究，为建立其快速繁殖体系提供依据。　　1材料与方法　　1.1材料本实验所用黑水缬草采自于黑龙江伊春绿潭地区，经佳木斯大学生药学教研室刘娟教授鉴定为黑

6、水缬草ValerianaamurensisSmir.exKom。实验所需试剂均为分析纯。　　1.2仪器SA-1600-2JZ多功能超净操作台(上海稼丰园艺用品有限公司)；ZPQ-280D智能气候培养箱(黑龙江东拓仪器制造有限公司);YXQ-LS-75SLL立式压力蒸气灭菌器(上海博讯实业有限公司医疗设备厂);电子天平FA2004(上海恒平科技有限公司)。　　1.3培养基与培养条件采用MS基本培养基，添加0.8%琼脂，3%蔗糖及不同浓度的植物生长调节剂，调节pH值至5.8，121℃高压灭菌30min，备用。所有培养

7、均在以下条件下进行：温度（25±1）℃，光照时间12h/d，光照强度1500～2000lx。　　1.4方法将材料经流水冲洗30min后，置于超净工作台上消毒接种。先于70%酒精中漂洗30s，再用0.1%HgCl2消毒8min，最后用无菌水冲洗7～8次，将消毒后的茎尖、茎段和叶柄切成长约1～1.5cm的小段，叶片切成0.5cm2大小，接种于预先配制好的培养基上，用于诱导愈伤组织。　　2结果　　2.1不同外植体对黑水缬草愈伤组织诱导的影响为了确定黑水缬草愈伤组织的最佳诱导部位，把茎尖、茎段、叶柄基部、叶柄中部和叶片分

8、别接种于含有MS+0.2mg/LNAA（萘乙酸）+5.0mg/L6BA（6苄氨基腺嘌呤）的培养基中。接种20d后，统计愈伤组织诱导率（见表1）。结果表明，在含有MS+0.2mg/LNAA+5.0mg/L6BA的MS培养基中，以茎尖和叶柄基部为外植体诱导愈伤组织较适宜，带节间的茎段诱导丛生芽较适宜。　　表1不同外植体对愈伤组织诱导的影响（略）　　2.2不同植物生长调节