蝇蛆壳聚糖急性毒性实验

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1、蝇蛆壳聚糖急性毒性实验覃容贵吴建伟国果付萍【摘要】目的观察蝇蛆壳聚糖的急性毒性反应。方法蝇蛆壳聚糖以最大浓度及最大给药体积的药液灌胃连续给药3次。连续观察14d，记录小鼠毒副反应情况。蝇蛆壳聚糖腹腔注射给药1次，连续观察14d，记录小鼠毒副反应情况。结果观察14d,灌胃给药全部动物健存，小鼠体重与空白对照组差异无显著性，未见任何毒性反应。计算蝇蛆壳聚糖最大给药量为2700mg/kg体重，相当于成人日用量的67.5倍。腹腔注射给药亦未见任何毒性反应。结论蝇蛆壳聚糖毒性较小。【关键词】蝇蛆壳聚糖小鼠

2、急性毒性甲壳素是地球上除纤维素之外最丰富的天然高分子聚合物。壳聚糖是甲壳素的脱乙酰化产物，是一种具有重要开发价值的天然多糖物质。壳聚糖以其独有的特性日益成为全世界研究的热点，在医学、生物工程、化工、食品、化妆品、农业、环保等领域得到广泛深入的研究〔1〕。昆虫甲壳素也是甲壳素的重要来源之一。研究表明，干蛆中甲壳素的含量高于虾蟹中甲壳素的含量，因此更具有可利用价值〔2〕。本实验通过观察对实验动物一次给药后所产生的毒性症状及其程度，出现和消失的时间，死亡的发生率并计算出其最大给药量，从而推测蝇蛆壳聚糖

3、对人的急性毒性的强弱。　　1材料与仪器　　1.1药物蝇蛆壳聚糖，自制。　　1.2动物昆明种小鼠,清洁级,体重18～22g，由贵阳医学院实验动物中心提供。　　1.3器材电子秤、量筒、1ml注射器、灌胃针。　　1.4统计学处理应用SPSS13.0统计软件，各组数据均以±s表示，各项指标组间差异的显著性比较采用IndependentSamplesTTest。　　2方法　　2.1灌胃的最大耐受量实验　　2.1.1动物分组取小鼠40只,体重18～22g，按体重随机分成两组，即蝇蛆壳聚糖给药组和蒸馏水对照组

4、，每组20只，雌雄各半。以每笼5只饲养。　　2.1.2药物配制蝇蛆壳聚糖临用前用蒸馏水稀释至所需浓度，以其能保持较好的流动性及可操作性，配制最大浓度为:33mg/ml。　　2.1.3给药途径和容积按每10g体重0.3ml药液，分别于上午8时、10时和12时灌胃给药，共连续给药3次。累计给药剂量为2700mg/kg。给药前禁食12h，正常饮水。给药量计算方法如下。　　单次灌胃容积(ml)=〔动物体重(g)×0.4〕/10　　单次灌入的药量(g)=单次灌胃容积(ml)×0.03　　相当于人用量的倍数

5、=(灌入的总药量×50×1000)/(动物体重×22)　　小鼠的最大耐受量=每只小鼠的耐受药量小鼠平均体重(20g)×成人平均体重(50000g)成人每日用量　　2.1.4观察毒性反应给药前后应观察体重、进食、进水的情况，密切观察异常毒性症状，观察症状包括：①行为活动：不安定、多动、发声；②神经系统反应：举尾、震颤、痉挛、运动失调、姿态异常；③自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流泪、排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸；④死亡。每日记录体重、毒性反应和死亡情况，在给药第1天每隔30min到1h观察1

6、次,以后每天观察并称体重1次，连续观察14d，记录动物毒性反应及死亡分布情况。以体重变化、反应情况综合评价实验结果，以不产生死亡的最大剂量为最大耐受量，推算出相当于临床用药量的倍数。　　2.2腹腔注射的急性毒性实验取20只小鼠,体重18～22g，雌雄各半。实验前12h禁食，不禁水，用配制浓度为30mg/ml的壳聚糖药液进行腹腔注射，每只小鼠注射量为0.3ml(相当于900mg/kg)。给药后即刻观察动物的反应情况，包括动物外观、行为活动、精神状态、食欲、大小便及其颜色、皮毛、鼻、眼、口有无异常分

7、泌物以及死亡情况。在给药第1天每隔30min到1h观察1次，以后每天观察，连续观察14d，记录动物毒性反应及死亡分布情况。　　3结果　　3.1灌胃的最大耐受量实验　　3.1.1存活情况20只小鼠壳聚糖药液按900mg/kg剂量灌胃后，无一死亡，继续观察14d，全部存活。　　3.1.2体重变化药后14d内小鼠活动、进食，排泄均正常，生长良好，毛色光亮，体重增加，无死亡。其平均体重均随实验时间的延长而增加，与相应时间的空白对照组相比，差异无显著性意义(P>0.05)。见表1和图1。　　表1小鼠

8、经口服蝇蛆壳聚糖最大给药量后体重变化情况（略）　　与空白对照组比较，▲P>0.05；n=10　　3.1.3对脏器的影响观察期结束处死动物，尸体肉眼观察,壳聚糖给药组和对照组小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器外形、大小正常，切面均未见异常变化。　　3.1.4最大耐受量测定20只小鼠各经壳聚糖药液3次灌胃总量为54mg,相当于临床成年人给药口服剂量的67.5倍。成年人的拟口服用量为2g/d。按公式计算:　　小鼠的最大耐受量=每只小鼠的耐受药量小鼠平均体重(20g)×成人平均体重(50000g)成人每