小鼠巨噬细胞功能的检测

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1、分子免疫学实验报告（一）2005.12.28小鼠巨噬细胞功能的检测伍国强（兰州大学草业学院兰州730020）摘要：本实验用CFA免疫小鼠后，检测小鼠腹腔巨噬细胞的数目以及用中性红检测巨噬细胞的吞噬能力。结果表明，免疫小鼠的腹腔巨噬细胞的数目和吞噬能力均有所提高。关键词：巨噬细胞；功能；检测1前言巨噬细胞是一种多功能免疫细胞,在机体的特异性和非特异性免疫反应中发挥重要功能。主要作用有：（1）吞噬杀伤作用：直接吞噬、调理吞噬作用。（2）抗原提呈作用：即外来的抗原性异物通过巨噬细胞的捕获、加工和处理后，与胞内合成的MHC-1/II类分子形成抗原肽－MHC分子复合物，并被

2、呈递到细胞膜表面，被TCR识别的作用。具有此作用的细胞叫抗原呈递细胞（antigenpresentingcell,APC)。此外，巨噬细胞表面还表达多种共刺激分子，如B7、ICAM-1、LFA-1,3等分别与T细胞上的CD28、LFA-1(CD11)、LFA-2(CD2)等相互作用，为T细胞的活化提供第二信号。（3）抗肿瘤作用：Mf被某些细胞因子如IFN-g激活后能有效杀伤肿瘤等靶细胞，其吞噬杀菌能力也显著提高。（4）分泌生物活性介质，产生免疫应答和其它免疫效应：如IL-1,12、IFN、TNF、PGE等;以及某些补体成份和凝血因子、组织修复因子等。为了检测巨噬细

3、胞的吞噬功能，我们用CFA免疫的小白鼠作为实验材料检测其腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用。2材料与方法2．1材料2．1．1药品：生理盐水、0.6%环磷酰胺、Hank’s溶液、1640培养基、细胞裂解液、中性红等。2．1．2仪器：血球计数板、细胞培养箱、分光光度计等。2．1．3动物：小白鼠2只，由兰大医学院动物实验中心提供。2.2、方法2．2．1小鼠腹腔巨噬细胞制备取小白鼠2只，分为对照组和实验组，对照组注射0.1ml生理盐水，试验组注射0.1mlcFA。48小时后，小鼠眼眶放血，断颈处死。腹腔注射3ml预冷的生理盐水。吸取腹腔渗出液5ml离心管（冰浴）。1600rpm

4、离心10分钟，弃上清，4℃生理盐水定容至5ml。血球计数板镜下巨噬细胞计数。用生理盐水调mΦ浓度为1×106，取4ml1600rpm离心10分钟，弃上清加4ml1640定悬。将mΦ加入24孔板，每组4孔，每孔1ml。37℃，5%CO2细胞培养箱贴壁培养纯化2小时。2．2．2巨噬细胞吞噬中性红试验将贴壁纯化好的mΦ弃1640培养液，对照孔加0.5ml生理盐水，其余每孔加0.5ml0.075%中性红,继续培养1小时。倾去上清液,用温PBS洗细胞3次,每孔加入细胞溶解液(为体积分数50%的乙酸和体积分数50%的无水乙醇)2ml,室温下放置30分钟,待细胞溶解后,即用分光

5、光度计测定OD值。以OD值表示巨噬细胞功能的强弱。3结果与讨论表：mΦ的浓度及吸光值　mΦ细胞个数mΦ浓度（个/ml)0D值对照组2566.4×1050.252试验组21765.44×1060.2833．1免疫小鼠腹腔巨噬细胞浓度从上表可以看出，2分子免疫学实验报告（一）2005.12.28用cFA免疫的小鼠腹腔巨噬细胞浓度较对照大，说明了CFA可以刺激巨噬细胞的大量产生。3．2免疫小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能增从上表可以看出，试验组的OD值较对照高，说明了免疫小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬能力增强了。2