免疫诊断精品医学ppt课件

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1、免疫的临床应用第一节免疫学诊断一、抗原或抗体的检测抗原-抗体反应包括沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体结合反应和中和反应等。抗原-抗体反应可用已知的特异性抗体检测未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的抗体。免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标记技术、发光免疫分析等免疫标记技术提高了抗原抗体反应的敏感性。（一）、抗原-抗体反应的特点1、特异性：抗原-抗体的结合是特异性结合2、可逆行：抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合3、可见性：抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象，于两者的分子比例密切相关抗原抗体比例对反应现象的影响（二）、抗原-抗体反应受

2、多种因素影响1电解质：抗原-抗体反应通常应用0.85%的氯化钠作为稀释液，以供给适应浓度的电解质。2温度：一般常使用反应在37度水浴或孵育箱中进行。3.酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度为PH6~8。抗原-抗体反应受多种因素影响（三）、常见的抗原抗体反应类型1、凝集反应(Agglutination)细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集现象，称为凝聚反应。（1）、直接凝集反应：将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。（2）、间接凝集反应：将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗

3、体反应出现颗粒凝集现象。血球凝集（3）、间接凝集抑制试验2、沉淀反应（Precipitation)血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，这一类反应称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行，如絮状沉淀。大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质，进行琼脂扩散故也称免疫扩散。(1)、单向免疫扩散(SingleImmunodiffusion)是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环，环的直径与抗原含量成正比相关。本法常用于测

4、定血清IgG、IgM、IgA和C3等的含量。含抗体的凝胶沉淀环（2）、双向免疫扩散（DoubleImmunodiffusion)是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性、组成和两种抗原相关性分析的检测。3、免疫标记技术用荧光素、同位素或酶等示踪物质标记抗体（或抗原）进行抗原-抗体反应。标记物质与抗体（或抗原）的化学连接未改变抗体（或抗原）的免疫学特性，同时标记物的性质依然存在，因而极大的提高了反应

5、的灵敏度，可以对微量物质进行定量、定性或定位检测。免疫标记技术主要有三种基本类型：免疫荧光技术、免疫酶技术和同位素标记技术。（1）、免疫荧光显微技术(ImmunofluorescenceTechnique)是用荧光素（常用的有异硫氰酸荧光素，FITC)与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的抗原反应，，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。包括直接荧光法、间接荧光法和补体法。直接荧光法：将荧光素直接标记抗体作标本染色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。间接荧光法：用一抗与

6、标本中的抗原结合，再用荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感性比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可用于多种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增加。补体结合免疫荧光法：此法是在间接法的第一步抗原—抗体反应时加入补体，使之与抗原——抗体复合物结合；再用荧光素标记的抗C3抗体进行示踪。间接免疫荧光法示意图免疫荧光显微技术（2）、酶免疫测定(EnzymeImmunoassay,EIA)是用酶（常用的有辣根过氧化物酶，HRP和碱性磷酸酶，AP)标记的抗体进行的抗原抗体反应。EIA将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后显色来判

7、定结果。常用的方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法，前者测定可溶性抗原或抗体，后者测定组织中或细胞表面的抗原。酶联免疫吸附试验(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay,ELISA)是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。用洗涤法将液相中游离成分洗除。主要有双抗体夹心法、间接法BAS-ELISA等。ELISA检测抗体（3）、放射免疫测定法(Radioimmunoassay,RIA)是用放射性核素标记抗原进行的免疫学检测技术。它将放射性核素显示的高灵敏性和抗原抗体反应的特异性

8、结合，使检测的敏感性达pg水平。常用于标记的放射性核素有I125和I131。常用于胰岛素、生长激素、药物等微量物质的测定。Ag*AbAg标记抗原特异性