总胆汁酸检测-医学ppt课件

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1、总胆汁酸测定Biobase血清总胆汁酸的检测酶比色法测定总胆汁酸循环法测定胆汁酸酶比色法测定总胆汁酸【原理】在3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)作用下，各种胆汁酸C3上α位的烃基(3α-OH)脱氢形成碳基(3α=O)。同时NAD还原成NADH。随后，NADH上的氢由黄递酶催化转移给碘化硝基四氮唑(INT)，产生红色的甲臢。甲臢的产量与总胆汁酸(TBA)成正比，在500nm波长比色。反应式如下：3α-羟基胆酸+NAD+3-氧代胆酸+NADH+H+NADH+H++INTNAD++甲臢(红色)Biobase酶比色法测定总胆汁酸【试剂】1．试剂Ⅰ黄递酶1000U，N

2、AD+1mmol，碘化硝基四氮唑(INT)0.5mmol,丙酮酸50mmol溶于0.1molpH7.5的磷酸缓冲液1L中，加表面活性剂适量。2．试剂Ⅱ3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)2000U溶于0.1molpH7.5的磷酸缓冲液中1L中。3．终止液1mol/LHCl。4．标准液(50μmol/L)24.38mg甘氨胆酸溶于1L经透析的混合血清中。Biobase酶比色法测定总胆汁酸【操作步骤】1．手工法按表加入物(ml)测定测定对照标准标准对照血清0.10.1a标准液0.10.1b试剂Ⅰ0.30.30.30.3c试剂Ⅱ0.10.1d去离子水0.10.1e混

3、匀，37℃水浴10min，加终止液0.1ml，摇匀，500nm波长，以水校零，读取各管A值。2．自动分析法一般无法做对照管，而是设置两点终点法，读取前后两个吸光度A1和A2。具体按说明书要求。Biobase酶比色法测定总胆汁酸【计算】手工法：TBA(μmol/L)=A测定-A测定对照/A标准-A标准对照×C标准自动分析法：TBA(μmol/L)=A测定2-A测定1/A标准2-A标准1×C标准【参考范围】60名健康成人的空腹TBA为4.9±2.38μmol/L,中餐后2hTBA为8.22±2.91μmol/L。Biobase酶比色法测定总胆汁酸-----临床意义

4、胆汁酸的生成和代谢与肝脏生理关系密切，血清胆汁酸水平是反映肝实质损伤的一个重要指标。血清总胆汁酸(TBA)测定对肝病的诊断有十分重要的价值。1．急性肝炎：急性肝炎时血清TBA显著增高，可达正常人水平的10～100倍，甚至更高，急性肝炎初愈患者血清TBA由最初的高值几乎与AST在同一时间降至正常水平，若持续不降或反而上升者则有发展为慢性的可能。2．慢性肝炎：慢性肝炎分为轻度、中度和重度三个类型，空腹总胆汁酸(F-TBA)和餐后2h总胆汁酸(P-TBA)测定对慢性肝炎的分型、监测、预后及疗效有着重要意义。Biobase酶比色法测定总胆汁酸-----临床意义3．肝硬

5、化：肝硬化时，肝脏对胆汁酸的代谢能力减低，血清TBA在肝硬化的不同阶段均增高，增高幅度一般高于慢性活动性肝炎。即使在肝硬化晚期亦如此。当肝病活动降至最低时，胆红素、转氨酶及碱性磷酸酶等指标转为正常，血清TBA仍维持在较高水平。4．乙醇性肝病：乙醇性肝病血清TBA可增高，当乙醇性肝病(包括肝硬化)发生严重的肝损伤时，血清TBA明显增高，而轻、中度损伤增高不明显。有报道认为，血清TBA测定对乙醇性肝病肝细胞损伤诊断的可信度和灵敏度远优于各种酶学检查和半乳糖耐量试验等指标，甚至建议将血清TBA再加上β-氨基己糖苷酶作为乙醇性肝病的诊断指标。有人认为，餐后60min-

6、TBA测定对乙醇性肝病诊断更有意义。Biobase酶比色法测定总胆汁酸-----临床意义5．中毒性肝病：在中毒性肝病时血清TBA也将异常。6．胆汁淤积：血清TBA测定对胆汁淤积的诊断有较高灵敏度和特异性。肝外胆管阻塞及肝内胆汁淤积包括急性肝炎、初期胆管性肝硬化、新生儿胆汁淤积、妊娠性胆汁淤积等均可引起TBA增高。在胆管阻塞的初期，胆汁分泌减少，使血清中的TBA显著增高，且在阻塞的不同阶段几乎保持不变；而血清胆红素水平则随不同阶段而变化。胆汁淤积患者肝组织中的胆汁酸含量明显高于正常人。肝外阻塞经引流缓解后，血清TBA水平迅速下降，而其它指标则缓慢恢复。Bioba

7、se酶比色法测定总胆汁酸-----临床意义所有肝病中，餐后血清TBA水平及异常率均比空腹时测定更灵敏，有人甚至认为餐后测定TBA对各种肝病的诊断灵敏度和特异性高达100%，而同时测定空腹血清胆汁酸有40%的患者在正常范围。急性肝炎是否转为慢性，连续监测餐后血清TBA可以观察慢性过程，慢性活动性肝炎是否发生纤维化改变，连续监测餐后血清TBA可以了解纤维化过程，不做肝活检即可获得肝损伤的程度。Biobase酶比色法测定总胆汁酸-----注意事项由于血清中TBA含量低，样品中存在干扰物质的影响相对就大，乳酸脱氢酶(LD)是主要的干扰物质，由LD反应中生成的NADH往

8、往比TBA反应中生成的量要大得多，因此