色谱学 lecture 7

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1、色谱学第七讲2011年11月7日色谱的分类1,3:normalsaturatedchambers;2,4:ultramicrocham2bers(totallyclosedlayer,withoutoverpressure);5,6,7:OPLCchambers(plateswith11,5,and3μmparticlesizes,respectively).加压薄层色谱法（OverpressuredLayerChromatography）ImportanceofTheoreticalPlates(N)HPLCChr

2、omatographofMuscadineGrapeJuiceWater-SolubleVitaminsWater-SolubleVitamins高效液相色谱法HPigherformanceLiquidChromatographyHPighressureLiquidChromatographyHPighricedLiquidChromatography概述高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经

3、典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。为了更好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面进行比较：1．高效液相色谱法与经典液相色谱法高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱配备了高压输液设备，流速最高可达103cm·min-1.例如分离苯的羟基化合物，7个组分只需1min就可完成。对氨

4、基酸分离，用经典色谱法，柱长约170cm，柱径0.9cm，流动相速度为30cm3·h-1，需用20多小时才能分离出20种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需lh之内即可完成。又如用25cm×0.46cm的Lichrosorb－ODS(5μ)的柱，采用梯度洗脱，可在不到0.5h内分离出尿中104个组分.高效液相色谱法特点：1.高压：一般：150～300kg/cm2甚至：500kg/cm22.高速：两相间交换：千分之几秒分析时间较经典法少很多(几分~几十分钟)3高效：气相：2000塔板/米液相：5000塔板/米4.高灵敏度：

5、紫外检测器：10－9g数量级荧光检测器：10－11g(百万分之几）试样量小（几微升）5.高选择性：可分析在性质上极为相似化合物（手性化合物、同位素、同分异构、空间异构）与气相色谱比较：相同点：都是重要的分离、分析手段气相的基本理论（塔板理论、定性定量方法）基本术语（色谱参数、色谱图、色谱柱效）不同点：ⅰ应用范围：气相：易挥发、热稳定液相：不易挥发、热不稳定但具有一定溶解性化合物，不适合气体。ⅱ流动相作用：气相：运载样品，不影响色谱分离液相：运载样品，参与、影响色谱分离，且起主要作用。ⅲ分析样品：气相：破坏样品，不能回

6、收。液相：不破坏样品，能回收。说明：高效液相色谱IV应用I高效液相色谱仪II液相色谱的分离模式III液相色谱色谱化学键合固定相高效液相色谱仪高效液相色谱仪的结构一般可分为4个主要部分：高压输液系统，进样系统，分离系统和检测系统。此外还配有辅助装置：如梯度淋洗，自动进样及数据处理等。其工作过程如下：首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相

7、色谱图。19载气系统进样系统色谱柱检测系统温控系统进样系统高压输液装置分离系统检测系统色谱仪器系统比较GCSystemI高效液相色谱仪高效液相色谱仪的流程高效液相色谱仪的高压泵高效液相色谱仪的检测器高效液相色谱仪的生产厂家高效液相色谱仪的分离柱流程仪器装置液相色谱仪可分为四大系统：泵系统进样系统分离系统检测系统泵系统泵系统发展趋势①高效：填料颗粒↓→分离效率↑→柱压降↑→泵的工作压力↑②分析时间短：更快流速→柱压降↑③减少洗脱液用量④液相色谱的多元洗脱系统泵的分类恒流泵恒压泵往复式柱塞泵注射泵气动压力放大泵进样系统高

8、效液相色谱柱比气相色谱柱短得多（约5～30cm），所以柱外展宽（又称柱外效应）较突出。柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起的峰展宽，主要包括进样系统、连接管道及检测器中存在死体积。柱外展宽可分柱前和柱后展宽。进样系统是引起往前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样技术要求较严。进样阀六通阀高效液相色谱仪的色谱柱球形填料不规则形填料高效液相色谱仪