苦参碱对smmc7721细胞mapk、jakstat信号通路的论文

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1、苦参碱对SMMC7721细胞MAPK、JAKSTAT信号通路的论文【摘要】的观察苦参碱对肝癌细胞smmc7721mapk通路和jakstat通路的影响。方法苦参碱和（或）jakstat途径特异性抑制剂ag490培养肝癌细胞smmc7721，rtpcr法检测苦参碱对smmc7721细胞erk,stat3、stat5mrna的影响，mc7721细胞erk、stat3、stat5、perk、pstat3、pstat5蛋白表达的影响。结果苦参碱能下调erk,stat3、stat5mrna表达水平，降低erk、stat3

2、、stat5、perk、pstat3、pstat5蛋白表达量（p<0.05或p<0.01）。ag490作用于smmc7721细胞后，erk,stat3、stat5mrna和erk、stat3、stat5蛋白的表达量与对照组比较差异无统计学意义(p>0.05),perk、pstat3、pstat5蛋白表达量与对照组比较显著降低(p<0.05或p<0.01)。与ag490组比较，ag490＋苦参碱组erk、stat3、stat5mrna的表达量显著降低(p<0.05)，erk、stat3、

3、stat5蛋白表达量显著降低(p<0.05)，perk、pstat3、pstat5蛋白表达量差异无统计学意义(p>0.05)。与苦参碱组比较，ag490＋苦参碱组erk,stat3、stat5mrna的表达量差异无统计学意义(p>0.05)，erk、stat3、stat5、perk、pstat3、pstat5蛋白表达量差异无统计学意义(p>0.05)。.结论苦参碱能下调erk、stat3、stat5mrna表达水平，因而能降低erk、stat3、stat5蛋白表达水平，抑制细胞信号转导通路，从而抑制

4、肝癌细胞增殖。【关键词】苦参碱通路jakstat通路ag490近年来中药的抗肿瘤作用日益受到重视，关于中药对肿瘤细胞信号转导的作用已有相关研究[1]，苦参碱的抗肿瘤作用也有相关研究。ras/raf/mapk通路和jakstat通路异常与肝癌的发生发展有密切联系，苦参碱抑制肿瘤作用途径是否与抑制细胞信号转导通路有关，目前尚不清楚。为研究苦参碱抑制人肝癌细胞smmc7721增殖的机制，本研究观察苦参碱对smmc7721细胞mapk通路和jakstat通路的影响，以jakstat途径特异性信号转导阻滞剂ag490为对照，从基因转

5、录水平和蛋白水平研究苦参碱对重要蛋白激酶erk、stat3、stat5在smmc7721细胞表达和活化的影响，为寻求治疗肝癌的临床有效药物提供理论基础。1材料与方法1.1细胞人肝癌smmc7721细胞株，购自中科院上海细胞生物所。1.2药品和试剂jakstat途径特异性信号转导阻滞剂ag490，为sigma公司产品。苦参碱为山东振东金晶制药有限公司惠赠。erk引物、stat3引物、stat5引物、βactin引物均由北京赛百盛生物工程公司合成；trizol为美国amresco公司产品；兔抗人erk、stat3、stat5、β

6、actin多克隆抗体，鼠抗人perk、pstat3单克隆抗体，羊抗人stat5多克隆抗体均为美国santacruz公司产品；pvdf膜购于博海生物工程公司，sds聚丙烯酰胺凝胶电泳低分子量标准蛋白质(蛋白marker)、考马斯亮蓝蛋白检测试剂盒购自北京中山生物工程公司。1.3方法1.3.1细胞培养将1×106/ml细胞接种于培养瓶，24h后，弃除培养液，分别加入含1.0mg/ml苦参碱[2]、50μmol/lag490、50μmol/lag490＋1.0mg/ml苦参碱的培养液，以不加药细胞作为对照。作用48h后收集细胞，用于实

7、验。1.3.2rtpcr法检测smmc7721细胞中erk、stat3、stat5mrna的表达按trizol试剂盒说明书提取细胞总rna。取4μl（1μg）提取的总rna，加入预先配置的逆转录体系中，加入mmlv逆转录酶1μl进行逆转录。取逆转录产物2μl进行pcr反应。erk上游引物：5'cgcaatggctactacaga3'，下游引物：5'cgaactgaggcgagaa3'，扩增的目的片段长度为358bp，退火温度55.2℃。stat3上游引物：5'tttggaggcaggaatagg3'，下游引物：5'

8、tggcttgacgggttgat3'，扩增的目的片段长度为230bp，退火温度50.6℃。stat5上游引物：5'tttggaggcaggaatagg3'，下游引物：5'tggcttgacgggttgat3'