紫草多糖的体外抗氧化活性研究

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1、紫草多糖的体外抗氧化活性研究作者：刘婷，陈韩飞，赵文彬，李德芳，王振华，郑秋生，陈韩英【摘要】目的研究紫草多糖的体外抗氧化作用。方法通过·OH、DPPH·、超氧阴离子、脂质过氧化及红细胞溶血反应体系，检测紫草多糖的抗氧化能力。均采用比色法测定。结果紫草多糖对·OH、DPPH·、超氧阴离子、脂质过氧化及红细胞溶血均有清除或抑制作用。结论紫草多糖在体外具有抗氧化作用。【关键词】紫草；多糖；抗氧化新疆紫草Arnebiaeuchroma(Royle)Johns为紫草科软紫草属植物，又名新疆软紫草，收载于《中国药典》

2、，是我国常用的中药［1］，多为草本，以根入药，因其根皮暗紫色，故名“紫草”。该药具有凉血活血、解毒透疹之功效。已有研究表明紫草具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎及镇痛、抗肿瘤及免疫调节等生理活性［2］。现代医学证明，心脑血管疾病、衰老及肿瘤疾病的发生和发展与体内的活性氧自由基有密切关系，而许多抗氧化成分可以清除这些自由基，阻断由它们引发的体内脂质过氧化，能够预防上述疾病的发生发展近年来，人们发现天然药物是极有潜力的抗氧化剂资源，从中寻找新的抗氧化剂是现代医药和保健品行业的发展方向。多糖是继黄酮类、多酚类、皂苷类

3、及鞣质类之后从天然植物中发现的又一类抗氧化活性成分［3］。许多植物多糖对各种活性氧(Reactiveoxygenspecies，ROS)具有清除作用，能减少脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的生成量，提高抗氧化酶活性(超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧化物酶GSHPx等)，表现出多种途经的抗氧化作用［4，5］。研究多糖及其衍生物的抗氧化活性，对于开发出更多更好的天然抗氧化剂，逐步取代存在一定毒性、致畸性和潜在致癌性的化学合成抗氧化剂，具有重要的现实意义［6］。本实验研究紫草多糖的体外抗氧化活性。　　1材料与仪

4、器　　1.1药材与试剂紫草，购自新疆阿克苏地区，干燥粉碎过筛备用；1，1二苯基2苦肼基自由基（Sigma公司）；Tris(北京拜尔迪生物公司)；2硫代巴比妥酸（上海科丰化学试剂有限公司）；焦性没食子酸（天津市富宇精细化工有限公司）；其余试剂均为分析纯。　　1.2仪器多功能酶标仪（Thermo3001VARIOSKANFLASH）；AR2140型万分之一电子天平（梅特勒托利多仪器有限公司制造）；DL360超声波清洗机(浙江象山县石浦海天电子仪器厂)。　　2方法　　2.1紫草多糖的制备称取100g

5、紫草粗粉用600ml的石油醚（30～60℃）脱脂3次，晾干，然后加入1000ml蒸馏水提取数小时，趁热过滤，重复3次。合并水提液并浓缩至原体积的1/4，加入3倍量无水乙醇，静置过夜后抽滤。将沉淀用无水乙醇、丙酮和乙醚依次洗涤，真空干燥，即得粗紫草多糖。　　2.2多糖对·OH的清除作用［7］　　空白组：30μl0.75mmol/L邻二氮菲溶液中加入60μl0.15mol/L的PBS（pH=7.4），加入30μl的蒸馏水，充分混匀后，加入30μl0.75mmol/L的硫酸亚铁，混匀后，再加入30μl的1%的H2

6、O2混匀。37℃的水浴中60min后，在536nm处，测定吸光度为A1；空白对照组：以30μl的蒸馏水代替H2O2重复上述操作，在536nm处，测定吸光度为A2；样品组：以30μl的样品代替30μl的蒸馏水重复空白组操作，在536nm处，测定吸光度为A3；样品对照组：60μl0.15mol/L的PBS中加30μl的样品，充分混匀后，加入90μl的蒸馏水，在536nm处测定吸光度为A4；空白参比组：60μl0.15mol/L的PBS加入120μl的蒸馏水，在536nm处测定吸光度为A5。清除率（%）=［（A3

7、A4A1+A5）/（A2A1）］×100%　　2.3多糖对DPPH·的清除作用［8］　　向100μlDPPH·乙醇溶液（浓度为0.2mmol/L）中加入100μl紫草多糖溶液。涡旋振荡器混匀，室温，避光放置30min后，在517nm处测定吸光度，平行测定3次，并以相同浓度的维生素C作为阳性对照，计算清除率。　　清除率（%）=［A0（A1A2）］/A0×100%式中：A0为DPPH·溶液100μl+无水乙醇100μl的吸光度；A1为DPPH·溶液100μl+样品溶液100μl的吸光度；A2为样品溶液

8、100μl+无水乙醇100μl的吸光度。　　2.4多糖对超氧阴离子的清除作用［9］　　取浓度为0.05mol/L的TrisHCl（pH=8.2）缓冲液100μl，25℃预热20min，加入50μl不同浓度的紫草多糖溶液，立即加入40μl的3mmol/L的邻苯三酚，振荡使之充分反应，4min后，用10μl的3mol/L的HCl终止反应，在325nm处测定吸光度（A1），平行测定3次，并以相同浓度的维生素C作为阳性