紫草多糖的体外抗氧化活性研究论文

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1、紫草多糖的体外抗氧化活性研究论文刘婷，陈韩飞，赵文彬，李德芳，王振华，郑秋生，陈韩英【摘要】目的研究紫草多糖的体外抗氧化作用。方法通过·OH、DPPH·、超氧阴离子、脂质过氧化及红细胞溶血反应体系，检测紫草多糖的抗氧化能力。均采用比色法测定。结果紫草多糖对·OH、DPPH·、超氧阴离子、脂质过氧化及红细胞溶血均有清除或抑制作用。结论紫草多糖在体外具有抗氧化作用。【关键词】紫草；多糖；抗氧化新疆紫草Arnebiaeuchroma(Royle)Johns为紫草科软紫草属植物.freela公司）；Tris(北京拜尔迪生物公司)；2硫代巴比妥酸（上

2、海科丰化学试剂有限公司）；焦性没食子酸（天津市富宇精细化工有限公司）；其余试剂均为分析纯。1.2仪器多功能酶标仪（Thermo3001VARIOSKANFLASH）；AR2140型万分之一电子天平（梅特勒托利多仪器有限公司制造）；DL360超声波清洗机(浙江象山县石浦海天电子仪器厂)。2方法2.1紫草多糖的制备称取100g紫草粗粉用600ml的石油醚（30～60℃）脱脂3次，晾干，然后加入1000ml蒸馏水提取数小时，趁热过滤，重复3次。合并水提液并浓缩至原体积的1/4，加入3倍量无水乙醇，静置过夜后抽滤。将沉淀用无水乙醇、丙酮和乙醚依

3、次洗涤，真空干燥，即得粗紫草多糖。2.2多糖对·OH的清除作用［7］空白组：30μl0.75mmol/L邻二氮菲溶液中加入60μl0.15mol/L的PBS（pH=7.4），加入30μl的蒸馏水，充分混匀后，加入30μl0.75mmol/L的硫酸亚铁，混匀后，再加入30μl的1%的H2O2混匀。37℃的水浴中60min后，在536nm处，测定吸光度为A1；空白对照组：以30μl的蒸馏水代替H2O2重复上述操作，在536nm处，测定吸光度为A2；样品组：以30μl的样品代替30μl的蒸馏水重复空白组操作，在536nm处，测定吸光度为A3；样品对

4、照组：60μl0.15mol/L的PBS中加30μl的样品，充分混匀后，加入90μl的蒸馏水，在536nm处测定吸光度为A4；空白参比组：60μl0.15mol/L的PBS加入120μl的蒸馏水，在536nm处测定吸光度为A5。清除率（%）=［（A3A4A1+A5）/（A2A1）］×100%2.3多糖对DPPH·的清除作用［8］向100μlDPPH·乙醇溶液（浓度为0.2mmol/L）中加入100μl紫草多糖溶液。涡旋振荡器混匀，室温，避光放置30min后，在517nm处测定吸光度，平行测定3次，并以相同浓度的维生素C作为阳性对照，计算

5、清除率。清除率（%）=［A0（A1A2）］/A0×100%式中：A0为DPPH·溶液100μl+无水乙醇100μl的吸光度；A1为DPPH·溶液100μl+样品溶液100μl的吸光度；A2为样品溶液100μl+无水乙醇100μl的吸光度。2.4多糖对超氧阴离子的清除作用［9］取浓度为0.05mol/L的TrisHCl（pH=8.2）缓冲液100μl，25℃预热20min，加入50μl不同浓度的紫草多糖溶液，立即加入40μl的3mmol/L的邻苯三酚，振荡使之充分反应，4min后，用10μl的3mol/L的HCl终止反应，在325nm处测

6、定吸光度（A1），平行测定3次，并以相同浓度的维生素C作为阳性对照。模型对照组（A0）用50μl的蒸馏水代替样品液。空白对照组（A2）用40μl的蒸馏水代替邻苯三酚。抑制率（%）=［（A0A1+A2）/A0］×100%2.5多糖对卵黄脂质过氧化的抑制作用［10］卵黄悬液的配制：新鲜鸡蛋去卵清，卵黄用等体积的pH=7.4的0.1mol/LPBS配成1∶1悬液，并用磁力搅拌器搅拌10min（置于冰箱中4℃）备用，使用前用PBS稀释成1∶25的悬液。吸取1∶25的卵黄悬液20ml，加入20ml的不用浓度的紫草多糖溶液，再加入20ml的25mmol

7、/L的FeSO4，用pH=7.4，0.1mmol/L的PBS补至200ml，37℃振荡15min，取出后再加入50μl的20%的三氯乙酸，4000r/min离心8min，吸取100ml上清液加入50ml0.8%TBA，封口，沸水浴中煮15min，在532nm处测吸光度，平行测定3次，并以相同浓度的维生素C作为阳性对照。以不加样品管的吸光度为A0，以样品加PBS管的吸光度为A样。抑制率（%）=［（A0A+A样）/A0］×100%2.6多糖对红细胞溶血的抑制作用［11］小鼠摘眼球取血，加入肝素制成抗凝血，以4000r/min离心5min，再用预

8、冷的生理盐水洗3次，制成0.5%的红细胞悬浮液。取红细胞悬浮液200ml，加入样品溶液40ml，最后加入0.1mol/L的H2O220ml，混匀，于37℃水浴中温浴