5氟尿嘧啶对肺腺癌a549细胞生长抑制作用机制的研究

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1、5氟尿嘧啶对肺腺癌A549细胞生长抑制作用机制的研究【摘要】目的研究5氟尿嘧啶抑制人肺腺癌细胞生长的作用方式。方法用不同浓度的5氟尿嘧啶处理体外培养的人肺癌A549细胞，应用MTT法、倒置相差显微镜和吖啶橙染色法分析检测A549细胞存活率的变化及细胞形态结构的变化。结果不同浓度的5氟尿嘧啶处理A549细胞，随着药物浓度的增加和处理时间的延长，细胞存活率明显下降;且低浓度使细胞呈铺展状态，细胞质内空泡增多，吖啶橙染色显示酸性膜泡增多，高浓度使细胞变圆，出现凋亡状态。结论5氟尿嘧啶能明显抑制A549细胞的生长，低浓度诱导

2、细胞发生自噬，高浓度引起细胞凋亡。【关键词】5氟尿嘧啶;肺癌;自噬;凋亡　　【Abstract】ObjectiveTostudytheinhibitiveeffectof5fluorouracilonthegroanlungcarcinomacellsA549.MethodsTTassay,invertedmicroscopeandacridineorangestaininginecellviabilityandmorphologicalchanges.ResultsUsingdifferentconcentration

3、sof5fluorouraciltodealenttime,cellsurvivalratedecreasedsignificantly;andlo,acridineorangestainingshoadethecellroundandcellapoptosis.Conclusion5fluorouracilinhibitedthegroa公司)。5氟尿嘧啶(深圳万乐药业有限公司)用二甲基亚砜(DMSO)溶解。　　1.2细胞培养A549肺癌细胞系在含10%胎牛血清的HAM′S/F12培养基中，置于37℃，5%CO2饱

4、和湿度的培养箱中培养。每3d半量换液传代，实验中选用对数生长期细胞。5Fu用DMSO溶解成1mol/L储存液-20℃保存，使用前用细胞培养液稀释成所需浓度。　　1.3实验分组根据加入的5氟尿嘧啶浓度不同将细胞分组：①对照组;②加药组(分别为5、10、20、40、80、100、200、300、400μM)。将各组细胞接种到24孔和96孔板中，每孔细胞浓度为2×104/ml，置于37℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中培养24h后加药，分别于加药后24、48h进行观察和分析。　　1.4细胞形态学观察各组细胞加药24、48h后，倒

5、置相差显微镜下观察24、48h细胞形态变化。　　1.5MTT法检测细胞琥珀酸脱氢酶的活性将上述培养于96孔板中的细胞根据实验分组加入不同浓度的5氟尿嘧啶，于各组药物处理终止前4h每孔加入5mg/mlMTT液20μl，继续培养4h，然后小心吸出各孔内培养液，加入100μlDMSO，振荡至结晶全部溶解，酶标仪上570nm测定光密度(OD值)。取各平行孔OD值的平均值,根据下式计算细胞相对存活率:存活细胞%=(实验组OD值/对照组OD值)×100%(以不含细胞的培养液为空白组调零)。　　1.6吖啶橙染色观察细胞质内酸性膜泡变化上

6、述培养于24孔板中的细胞用不同浓度的5氟尿嘧啶处理48h后，将旧培养液吸出，PBS洗两遍，加入两滴0.1mg/ml吖啶橙染液染色1min，PBS洗两遍，于倒置荧光显微镜下观察结果。　　1.7统计学处理实验数据以x±s表示,经重复测量资料的方差分析,P<0.05表示有统计学意义。　　2结果　　2.15氟尿嘧啶对A549细胞存活率的影响用MTT法检测了5氟尿嘧啶对A549细胞增殖的影响(表1)。用5、10、20、40、80、100、200、300、400μM的5氟尿嘧啶，分别处理A549细胞24、48h。数据显示，

7、5氟尿嘧啶对A549细胞的影响表现出一定的浓度和时间依赖性关系。随药物处理时间的延长，细胞存活率降低;随药物浓度的增加，细胞存活率也表现出降低趋势。　表15Fu对A549细胞存活率的影注：单因素方差分析P<0.01，进一步两两比较(同一时间段　　不同加药浓度组与对照组相比)P均小于0.01　　2.25氟尿嘧啶对A549细胞形态学影响：A549细胞经不同浓度的5氟尿嘧啶处理48h后，在倒置显微镜下观察细胞形态变化(图1)，发现10～100μM处理组细胞质出现明显的空泡化，且10、20μM组空泡化现象尤其明显;30

8、0μM处理组细胞出现明显的细胞凋亡特征;400μM处理组除有凋亡外还出现了明显的细胞坏死现象。　　2.3吖啶橙染色观察细胞质变化为了进一步明确5氟尿嘧啶处理A549细胞后引起的细胞质的变化，我们用吖啶橙染色来观察细胞质内酸性膜泡的变化。不同浓度的5氟尿嘧啶处理A549细胞48h后，吖啶