幽门螺杆菌工程疫苗研究进展

《幽门螺杆菌工程疫苗研究进展》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、幽门螺杆菌工程疫苗研究进展　　幽门螺杆菌(HelicobacterPylori，Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡及胃肠道淋巳瘤的主要致病因素，并与胃癌发生密切相关，archettietal[10]实验了LT，LTK63佐剂与全菌、内源性VacA，Ure，CagA及重组VacA，CagA的免疫保护作用，发现都可激发小鼠产生免疫保护[11]．2关于佐剂粘膜免疫需要强的佐剂以提高抗原的免疫原性，粘膜佐剂可刺激Th2型粘膜免疫反应．未来的Hp疫苗必须辅以能有效诱导粘膜免疫的佐剂，活化Th2细胞免疫途径，才能产生

2、大量的slgA，才能克服Hp抗原性弱的问题．CT和LT是目前研究最为深入的粘膜免疫佐剂，它们都具有较强的粘膜免疫原性和粘膜佐剂效应，与不相关可溶性蛋白抗原同时口服免疫机体，能消除机体对这些免疫蛋白的耐受性，诱导机体产生针对CT及其免疫蛋白的长期免疫记忆．它们都能促进抗原递呈细胞的抗原呈递，选择性诱导抗原特异性Th2细胞应答，促进上皮内淋巴细胞的有丝分裂和B细胞种型分化，但由于CT口服时在某些品系小鼠诱生超敏反应，而改用CT-B单位即可避免，故有人认为CT-B是至今为止最为有效最为安全的粘膜免疫佐剂之

3、一，目前人们更为亲睐LT-B，因为LT-B较CT-B拥有更可靠的安全性和有效性，Michertietal[12]在临床实验了重组HpUre和LT口服免疫Hp染的志愿者的安全性和免疫原性，结果发现治疗患者仅出现腹泻等，较少的副反应；而使用脱毒LT(如LTK63)可避免以上副反应．LTK63与LT区别在于丝氨酸取代了第63位的赖氨酸，LTK63作为粘膜佐剂在动物模型上已成功诱导抗原特异的体液免疫反应和风疹病毒特异的毒性淋巴细胞反应，因此LTK63作为佐剂完全可能在未来临床中用于Hp治疗性免疫。最近Kia

4、l[13]采用聚微囊包襄的全菌抗原口服免疫小鼠同样可诱导小鼠产生强烈的系统和粘膜免疫，免疫8inant)，又称抗原表位(epitope)．它是蛋白质的表面性质，常出现在分子的高暴露区域，其性质、数目及空间的构型决定其抗原特性，为精确描述抗原决定簇，可用同源蛋白质来评价特定氨基酸替换的影响以确定抗原表位的所在区，不过这里的表位是指“功能表位”，即一种蛋白质能在免疫检测中结合抗体的那一部分或片段、因此研究某种蛋白质有意义的亚单位结构和功能，它在实验使用上有买际意义。利用计算机软件可以预测蛋白质的空间结构

5、和抗原位点，这可作为抗原多肽合成试验的选段参考，适当左右扩展成10～20肽，也可用作抗原克隆表达实验前PCR引物设计时模板范围选择的参考，使扩增出的序列能够覆盖较多的预测点，这对我们研制Hp基因工程疫苗有重要指导意义。4Hp疫菌的免疫保护机制免疫应答类型的确定直接决定人类疫苗学研究发展，Hp感染的免疫应答类型很难确定，这是因为自然感染Hp后，引起的免疫反应无保护性；而感染Hp的啮齿类动物，采用经典免疫学技术很难分析疫苗的治疗性免疫应答机制[14]．最近有报道在Hp感染者胃粘膜中slgA水平明显高于对

6、照组，提示粘膜slgA在抗Hp感染中具有重要作用，Doigeetal用Hf超声裂解物免疫小鼠，发现抗螺杆菌slgA水平与保护作用密切相关．T淋巴细胞在Hp感染中的保护作用目前知之甚少．Hp感染患者外周血单核细胞的刺激和抑制作用已有报道，Hp感染的小鼠和人类，THI细胞被抑制，小鼠的保护性免疫与THI细胞抑制和TH2细胞活化密切相关[15，16]．目前Hp疫苗诱导机体产生保护性免疫和治疗作用的机制仍不清楚，Ghiaraetal[9]认为疫苗可能改变胃内Thl型应答反应，转变为THO或Th2型保护性反应

7、；并且在慢性Hp感染小鼠模型中出TH1细胞反应口服Hp菌苗诱导THO或Th2细胞活化反应，清除体内感染的细菌，Hp感染的小鼠模型研究发现Th2反应刺激程度与胃粘膜内细菌减少和胃炎消退密切相关，Hp免疫小鼠体内发现IFN-γ下清Thl反应，胃内Th2细胞分泌IL-4水平增高；体外培养Hp免疫小鼠后，发现大量脾细胞中有Hp特异Th2细胞，脾细胞接种其他动物(与对照相比)发现明显减少胃内Hp感染量．Mohammadietal[17]也发现相似结果，并证明IL-4基因敲除小鼠体内Hp感染数量明显高于对照组，

8、目前研究表明Hp慢性感染人群Thl细胞反应占主要地位，人类胃粘膜反应是否与小鼠相同？如果类似，采用无毒粘膜佐剂，治疗性疫苗可能是清除Hp感染的新的方法[18，19]。5Hp感染的动物模型研制Hp疫苗的先决条件是必须建立合适、稳定的Hp慢性感染动物模型，以分析免疫应答和免疫保护机制．在螺杆菌属细菌中，Hf与Hp的生化特征和生物学行为最为接近，其16sDNA基因序列与Hp的同源性高达94．6％，Ure、过氧化物酶、过氧化氢酶均为阳性，生长条件相近，还具有相对较广的宿主范围