幽门螺杆菌黏唾液酸黏附素疫苗治疗小鼠幽门螺杆菌感染

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1、幽门螺杆菌黏唾液酸黏附素疫苗治疗小鼠幽门螺杆菌感染作者：杨勤,杨明刚,董洋,EllenXind,史俊容【摘要】　　目的:利用人类幽门螺杆菌()感染的小鼠模型研究唾液酸黏附素疫苗治疗感染的作用.方法：把已感染的小鼠分成4组,分别通过灌胃方法给予唾液酸黏附素100μg加霍乱毒素CTμg、单纯唾液酸黏附素100μg、单纯CTμg或PBS,1次/wk,共4次,治疗结束后wk处死动物,取胃粘膜行半定量细菌培养检查情况.结果：治疗后各组根除率分别为:唾液酸黏附素加CT组30%、单纯唾液酸黏附素组、单纯CT组及PBS组根除率均为0%.差异有统计学意义.未根除的小鼠，唾液酸黏附素加CT组的定植密度

2、明显低于其它3组.结论：唾液酸黏附素能够作为多价治疗疫苗的组分之一.【关键词】幽门螺杆菌；唾液酸黏附素；克隆；免疫；疫苗ImmunizationtreatmentofHelicobacterpyloriinfectionwiththevaccinecomposedofsialicacidadhesinandCT:Ananimalmodelstudy【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectsofthevaccineconsistingofHelicobacterpylori()sialicacidadhesinandcholeratoxin(CT)in

3、thetreatmentofinfectioninainfectedmousemodel.METHODS:TheC57BL/miceinfectedwithweredividedintogroups.Themiceofeachgroupwereimmunizedbysialicacidadhesin(100μg)plusCT(μg),sialicacidadhesin(100μg),CT(μg),PBSorallyrespectively,onceaweekforweeks.Fourweeksafterlasttreatment,allanimalsweresacrificedan

4、dstomachbiopsieswerecollectedtodetectbythesemiquantitativebacterialcultureassay.RESULTS:Theeradicationrateofthevaccinegroupwas0%.Theeradicationratesoftheothergroupswereall0%.Thereweresignificantdifferencesintheeradicationrateamongthevaccinationgroupandtheothercontrolgroups(P【Keywords】Helicoba

5、cterpylori;sialicacidadhesin;cloning;immune;vaccine　　0引言我们已经构建了幽门螺杆菌唾液酸黏附素的高效原核表达体系［1-2］，并对其进行了纯化及功能研究［3］.现通过建立感染的小鼠模型观察唾液酸黏附素疫苗治疗感染的作用，为多价治疗性疫苗的研制奠定基础.1材料和方法材料无特定病原体C57BL/6小鼠30只，wk龄，雄性，质量12~1g，饲养条件符合2级动物要求.纯化的重组唾液酸黏附素在以前的研究中已经制备；其余试剂为国产分析纯.的固体培养：取冷冻保存的菌种一环于固体培养基上连续划线接种，2h内置厌氧培养箱，37℃微需氧环境中培养7h

6、，湿度保持95％以上.的菌落呈园形，凸起、光滑、灰白色、半透明，直径~左右.液体培养：取固体培养基上生长的菌落至布氏肉汤中，抽滤瓶抽气换气2次以满足微需氧条件，恒温振荡培养120r/min培养48~7h.的鉴定包括菌落形态、涂片观察、尿素酶实验.灌胃用的要求：革兰氏染色阴性，形态呈S形、螺旋形、杆状，暗视野下有活力，不含杂菌，密度约为1012/L.感染小鼠模型的建立:采用参考文献［4］方法驯化ss1株，分离可在小鼠胃内稳定定植的ss1株，固体培养2~d，菌落经鉴定后用布氏肉汤洗下，调整细菌浓度至101CFU/L，每只小鼠灌胃所有动物灌胃前禁食1h，禁水h.灌胃后禁食h.连续5次，1

7、wk完成.采用胃管法以确保灌入胃内.末次灌胃后wk随机处死5只小鼠，剖腹取胃，沿纵轴将胃切为3部分，一份行快速尿素酶试验，一份置40g/L甲醛固定供组织学检查，一份细菌培养，检查是否感染方法将已鉴定感染的剩余的25只小鼠随机分成4组：①疫苗组：经口喂饲唾液酸黏附素100μg加霍乱毒素μg；②单纯唾液酸黏附素疫苗组：经口喂饲唾液酸黏附素100μｇ；③单纯霍乱毒素组：经口喂饲ＣＴμｇ；④PBS组：经口喂饲PBS00μg/鼠/次.治疗组10只小鼠:后3组为对照组，每组5只小