组织蛋白酶l与人腰椎间盘退变关系的研究

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1、组织蛋白酶L与人腰椎间盘退变关系的研究【摘要】［目的］探讨CathepsinL与人腰椎间盘退变的关系。［方法］实验组标本来源于腰间盘突出症的患者，在外科手术过程中取得的退变间盘组织，并根据术中所见将腰间盘突出分为非包含型组和包含型组；对照组间盘来源于胸腰段骨折行前路手术患者手术中切除的间盘组织，以上标本采用HE染色组织学观察椎间盘的退变特征，免疫组织化学S-P法和逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测人腰椎间盘细胞CathepsinL蛋白表达。［结果］HE染色组织学观察在退变组间盘中，各标本均表现出一定的退变特征：纤维环板层结构紊乱，软骨细胞巢状增生，纤维

2、环粘液瘤样变，髓核软骨细胞减少，纤维细胞增生，玻璃样变及纤维化，髓核毛细血管的侵入，炎性细胞的浸润等。在未包含型组与包含型组比较显示了更多的髓核毛细血管侵入和炎性细胞浸润，髓核及纤维环退变更严重，纤维细胞增生及瘢痕形成。免疫组织化学染色显示组织蛋白酶L阳性率在退变组(90.68±7.61)%明显高于对照组(10.00±8.69)%，并且在非包含型组(95.45±4.63)%明显高于包含型组(86.93±7.49)%。RT-PCR结果显示组织蛋白酶L的mRNA表达水平在退变组(1.445±0.206)%较对照组(0.526±0.378)%明显上调，并且在非包含型组

3、(1.608±0.044)%明显高于包含型组(1.282±0.166)%。以上结果均经统计分析证实组间差异有统计学意义。［结论］CathepsinL与人腰椎间盘退变有关。【关键词】椎间盘；退变；组织蛋白酶Abstract［Objective］TodeterminetheinvolvementofcathepsinLinthepathomechanismoflumbarintervertebraldiscdegeneration.［Method］Experimentalgroupadefrom25casesbardiscprotrusiondiseaseandco

4、ntrolgroupadefrom5casesofthoracic-lumberbroken.ThethirtydiscspecimenscollectedatthetimeofsurgerybeddedsectionsofallintervertebraldisctissueatoxylinandErosin,andthenimmunohistochemicallystainedonoclonalantibodiesforCathepsinL.Furthermore,mRNAofcathepsinLfromallthespecimensatoxylinande

5、osinstainingrevealedobvioussignsofdegenerationcharacterizedbydisorganizationoftheorientedlamellarstructureoftheanulusfibrosus,formationoffissures,cysticormyxomatouschange,cloningofchondrocyte-likecells,cartilaginousmetaplasiaoftheanulus,vascularinvasioninouteranulus.CathepsinLmunoloc

6、alizedindisccellsat　varioussitesexhibitingdegeneration.AndCathepsinL-positivecellratioobservedindegeneratedgroup(90.68±7.61)%barintervertebraldiscs(95.45±4.63)%ore,mRNAofcathepsinLechanismoflumbarintervertebraldiscdegeneration.KeyRNA转录水平。1.3.3.1提取总RNA具体步骤按RNAout使用手册进行。1.3.3.2逆转录反应：按以

7、下条件进行６５℃１min→30℃5min→15-30min内匀速升温至６５℃→９８℃５min→５℃5min。1.3.3.3ＰＣＲ（cathepsinL）:取cDNA3μl，按下列条件进行ＰＣＲ反应：94℃３min→②84℃４5s→③56.7℃1min→④72℃1min→⑤72℃7min②-④循环35次。引物序列：CathepsinL上游：5′-CAACCAAGGCTTTGAGAT-3′下游：5′-TCCAAGGGAGTGTTCAGG-3′共366bp。β－actin上游：5′-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3′下游：：5′-CTCCTTAATGTCA

8、CGCACGATTTC-